我司供应的生化检测试剂盒，仅供科研使用。

商品介绍：

测定意义

辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。

测定原理

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH，NADH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在570nm下检测吸光值；而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用MTT还原法检测。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

通用规则：

1、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

3、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

4、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。

5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

6、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

7、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

8、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

9、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

10、底物是光敏感的，要在临用前现配。

实验通用规则：

1、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

3、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

4、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。

5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

6、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

7、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

8、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

9、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

10、底物是光敏感的，要在临用前现配。

CNE1, 人鼻咽癌细胞系     Human

HT-29, 人结肠癌细胞     Human

T24, 人膀胱癌细胞     Human

5-8F, 人高转移鼻咽癌细胞系     Human

HCT116, 人结直肠癌细胞     Human

LncaP, 人前列腺癌细胞     Human

6-10B, 人鼻咽癌细胞系     Human

lovo, 人结肠癌细胞     Human

DU 145, 人前列腺癌细胞     Human

Hep-2, 人喉癌细胞系     Human

MDA-MB-231, 人乳腺癌细胞     Human

HL-60, 人早幼粒白血病细胞     Human

CaEs-17, 人食管癌细胞株     Human

MG-63, 人骨肉瘤细胞     Human

kasumi-1, 人白血病细胞株     Human

RBE, 人肝胆管癌细胞     Human

MiaPaCa-2, 人胰腺癌细胞     Human

KM3, 人多发性骨髓瘤细胞     Human

QGY-7701, 人肝癌细胞     Human

PANC-1, 人胰腺癌细胞     Human

Girdin    肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体     根霉属的菌

AKAP2    蛋白激酶A2抗体     戴尔根霉

AT2R2    血管紧张素Ⅱ受体2抗体     科恩根霉

ASH1L    ASH1蛋白抗体     华根霉

AADACL2    芳香乙酰胺脱乙?；秆鞍?抗体     白腐菌

AAMP    血管内皮细胞迁移蛋白抗体     荨麻青霉

AKR1B10    醛糖还原酶相关蛋白质抗体     小刺青霉

AKR1C2    胆汁酸结合蛋白DDH2抗体     娄地青霉

ANGPTL3    血管生成素样蛋白3抗体     产紫青霉

Acylglycerol Kinase    甘油酯激酶线粒体抗体     特异青霉

phospho-alpha Adducin(Ser726)    磷酸化内收蛋白a1抗体     淡紫青霉

ATG16L2    自噬体ATG16L2蛋白抗体     岛青霉

ACPT    睾丸酸性磷酸酶抗体     灰黄青霉

Acid Phosphatase    酸性磷酸酶抗体     园弧青霉=桔灰青霉

AKIP    极光激酶A相互作用蛋白1抗体     顶青霉

APOL6    载脂蛋白样蛋白6抗体     黄绿青霉

ARTS    凋亡相关蛋白TGFb信号抗体     产黄青霉

A2LD1    A2LD1蛋白抗体     阿达青霉

辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒A4GNT    α1,4-N-乙酰葡糖胺转移酶α4Gn-T抗体     拟青霉

AADAC    芳香乙酰胺脱乙?；缚固?    棉铃虫拟青霉

AADACL4    芳香乙酰胺脱乙?；秆鞍?抗体     玫烟色拟青霉

AASDHPPT    氨基乙二酸半醛脱氢酶磷酸泛酰巯基乙胺转移酶抗体     露湿漆斑菌

测定步骤：

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样，不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温浴

1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。