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技術(shù)文章

亞巴猴腫瘤病毒病毒PCR試劑盒使用方法

閱讀:100          發(fā)布時間:2025-4-16

亞巴猴腫瘤病毒病毒PCR試劑盒使用方法

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

按照試劑盒操作說明或者微生物樣品處理方法做好樣品前處理。

1.2 DNA 提取

根據(jù)您實驗室的具體情況和樣品類型,選擇適當(dāng)?shù)奶崛〔呗苑椒?。為了使實驗結(jié)果穩(wěn)定、有效、可靠,我們建議使用商品化的試劑盒進行提取,嚴(yán)格按照對應(yīng)試劑盒說明書進行操作,樣本核酸提取過程中應(yīng)避免污染,提取好的模板樣品如不能立即檢測,建議-15℃以下保存。

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2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

2.1 從-15℃以下冰箱中取出試劑盒平衡到室溫(20~25℃),注意避免強光照射,待溶解后振蕩混勻并低速離心 10 s,使用低吸附吸頭分液取樣,避免試劑損失和浪費。

2.2 根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

煙曲霉反應(yīng)液

煙曲霉擴增液

用量(樣本數(shù)為N)

19.5μL

0.5μL

2.3 在適當(dāng)容積的無菌離心管中加入上述試劑,充分振蕩混勻后 2000 rpm 離心 10 s,按照 20 μL/管分裝量將試劑分裝至八聯(lián) PCR 反應(yīng)管中。

2.4 蓋緊八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋, 并注意做好相應(yīng)標(biāo)識(請標(biāo)記在八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋兩端突出部位,切勿標(biāo)記在八聯(lián) PCR 反應(yīng)管蓋中間,以免影響信號采集)。將 PCR 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū),剩余試劑放回-15℃以下冰箱冷凍保存。

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1.2 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心,核酸加樣過程中應(yīng)避免污染。


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