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技術(shù)文章

鼠抗人Bcl-0單克隆抗體操作步驟

閱讀:248          發(fā)布時間:2022-6-14

鼠抗人Bcl-0單克隆抗體操作步驟:


1 . 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù),可在此步后進行


⒉ 緩沖液洗  3min/2  次。


⒊ 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在  Hydrogen Peroxide Block  中孵育  10-15  分鐘。


⒋ 緩沖液洗  5min/2  次。


⒌ 滴加  Ultra V Block  , 在室溫下孵育  5  分鐘以封閉非特異性的背景染色。


(注:孵育不要超過  10  分鐘,否則會導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有  5  -  10%  正常羊血清,這一步可以省略。)


⒍ 緩沖液洗  5min/2  次。


⒎ 滴加一抗工作液  37  ℃孵育  1  -  2  小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)


⒏ 緩沖液洗  5min/2  次。


9  . 滴加  Primary Antibody Enhancer (增強子),在室溫下孵育  20  分鐘。


10  .緩沖液洗  5min/2  次。


11  .滴加  HRP Polymer (酶標(biāo)二抗) ,在室溫下孵育  30  分鐘。


(注: HRP Polymer  對光敏感,應(yīng)避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)


12  .緩沖液洗  5min/2  次。


13  .向  1ml DAB Plus Substrate  (或  AEC Plus Substrate)  中滴加  1-2  滴  DAB Plus Chromogen  (或  AEC Plus Chromogen ),混勻后滴加到切片上,孵育  3  -  15  分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)



14  .自來水充分沖洗,復(fù)染 ,脫水,透明,封片。

NCI-H661(人大細胞肺癌細胞)

M-NFS-60 (小鼠白血病細胞G-CSF依賴性)

PA319(人大腸癌細胞)

PATU8988(人胰腺癌細胞)

PC-3M(人前列腺癌細胞)

SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細胞)

SMC-1(人胸膜瘤細胞)

SW1116(人結(jié)腸腺癌細胞)

TE-13(人食管癌細胞)

TG-905(人腦膠質(zhì)母細胞瘤細胞)

VE(人血管內(nèi)皮細胞)

MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細胞前體細胞)

WTRL1(大鼠肺細胞)

Y3-Ag 1.2.3(大鼠骨髓瘤細胞)

293E(人胚腎細胞(EBNA1基因修飾))

293ET(人胚腎細胞(SV40T和EBNA1基因修飾細胞))

293FT(人胚腎細胞)

2V6.11(人胚腎細胞)

A3(人T淋巴細胞白血病細胞)

A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細胞)

AML-193(人急性單核細胞白血病單核細胞)

B16-F1(小鼠黑色素瘤細胞)

B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細胞)


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