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技術(shù)文章

魚超敏C反應(yīng)蛋白elisa試劑盒操作步驟詳述

閱讀:435          發(fā)布時(shí)間:2020-9-2

魚超敏C反應(yīng)蛋白elisa試劑盒操作步驟 

    實(shí)驗(yàn)開始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲坪盟性噭?;試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí),均應(yīng)用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。建議各實(shí)驗(yàn)室在操作前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以建立佳稀釋倍數(shù)。 
    1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00ul,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。 
    為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 
    2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),37℃,60分鐘。 
    3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 
    4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100ul,37℃,60分鐘。 
    5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 
    6. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 
    7. 依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。 
    8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后立即進(jìn)行檢測。

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