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技術(shù)文章

酶免疫技術(shù)在檢驗醫(yī)學中得到廣泛應用并不斷得到更新

閱讀:720          發(fā)布時間:2019-4-4

       目前,免疫學檢驗中的標記技術(shù)主要包括酶免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、放射免疫技術(shù)、金免疫技術(shù)、化學發(fā)光免疫技術(shù)等。其中酶免疫技術(shù)是以酶標記的抗體(抗原)作為主要試劑,將抗原抗體反應的特異性和酶催化底物反應的性和專一性結(jié)合起來的一種免疫檢測技術(shù)。作為經(jīng)典的三大標記技術(shù)之一,酶免疫技術(shù)在檢驗醫(yī)學中得到廣泛應用并不斷得到更新。

一、常用的酶及顯色底物

  在酶免疫技術(shù)中用于標記的酶應具有催化活性高、催化專一性強;與抗原抗體偶聯(lián)后不影響抗原抗體的免疫反應性和酶活性;催化的底物易于配制、保存且催化底物產(chǎn)生的信號產(chǎn)物易于觀察和檢測;對人無害且價廉、易得等特點,目前常用的酶及底物見表1。

表1 常用酶及底物

常用酶 底物 加終止液前顏色 加終止液后顏色

辣根過氧化物酶(HRP) 鄰苯二胺(OPD) 橙黃色 棕黃色

RZ>3.1 四甲基聯(lián)苯胺(TMB) 藍色 黃色

堿性磷酸酶(AP) 對硝基苯磷酸酯(p-NPP) 黃色 黃色

二、標記物的制備

  在酶免疫技術(shù)中制備標記物的抗原應純度高、抗原性完整;制備標記物的抗體應特異性好、效價高、親和力強、比活性高、能批量和易于分離純化。

  制備酶標記物的方法應符合簡單、產(chǎn)量高;避免酶、抗體(抗原)、酶標記物各自形成聚合物;標記反應不影響酶的活性和抗原抗體的免疫反應性等原則。標記物制備的方法基本屬于兩類:

(一) 交聯(lián)法

  交聯(lián)法是以一可同時與酶和抗體(抗原)結(jié)合的 交聯(lián)劑作為“橋”,分別連接酶與抗體(抗原)的方法,此類方法中目前zui常用的是戊二醛交聯(lián)法,形成的結(jié)合物為:酶-戊二醛-抗體(抗原)

(二) 直接法

  直接法是用一活化劑首先將酶活化,被活化的酶分子上的基團直接可與抗體(抗原)結(jié)合形成標記物,如過碘酸鈉法。形成的結(jié)合物為:酶-抗體(抗原)。

三、酶免疫技術(shù)類型

  酶免疫技術(shù)按照抗原抗體系統(tǒng)是定位于組織細胞上還是存在于液體樣品中分為酶免疫組化技術(shù)和酶免疫測定(EIA),酶免疫測定又可分為均相酶免疫測定和異相酶免疫測定。

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