小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14源自BALB/c小鼠由Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。可產(chǎn)生溶菌酶；sIg-, Ia-，Thy-1.2-。為檢測到病毒顆粒的分泌，XC斑點形成試驗陰性。該細胞可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖；可以經(jīng)抗體依賴分裂綿羊紅細胞與腫瘤靶細胞；LPS或PPD處理2天可誘導分裂紅細胞，但對腫瘤靶細胞無作用。

1.產(chǎn)品名稱：小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14
2.組織來源：海馬體組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介：
小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14分離自海馬體；海馬體（Hippocampus），又名海馬回、海馬區(qū)、大腦海馬，海馬體主要負責記憶和學習。海馬神經(jīng)元細胞是海馬區(qū)的主要細胞組成，主要功能是參與近期記憶、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié)、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng)，在學習、記憶、情緒反應及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理變化等方面有重要作用，而且海馬組織是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的神經(jīng)干細胞聚集區(qū)，具有高度序化板層結構和神經(jīng)元相對獨立分布的特點，境界相對清晰，便于取材，因此，海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎醫(yī)學和臨床醫(yī)學研究者當做理想的實驗模型。海馬神經(jīng)元細胞培養(yǎng)是研究神經(jīng)細胞生物學特性和外源干擾因素作用（細胞因子）的有效細胞模型，其在神經(jīng)生物學，發(fā)育生物學體外實驗研究中已被廣泛應用。
本公司生產(chǎn)的小鼠海馬神經(jīng)元細胞采用胰蛋白酶消化法、化學試劑抑制法結合神經(jīng)元細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經(jīng)MAP-2免疫熒光鑒定，純度可達85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：Neurobasal-A、B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

細胞的培養(yǎng)

體外神經(jīng)細胞的培養(yǎng)已成為神經(jīng)生物學研究中十分有用的技術手段。神經(jīng)細胞培養(yǎng)的主要優(yōu)點是:(1)分散培養(yǎng)的神經(jīng)細胞在體外生長成熟后,能保持結構和功能上的某些特點, 而且長期培養(yǎng)能形成髓鞘和建立突觸聯(lián)系,這就提供了體內(nèi)生長過程在體外重現(xiàn)的機會。(2)能在較長時間內(nèi)直接觀察活細胞的生長、分化、形態(tài)和功能變化,便于使用各種不同的技術方法如相差顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、同位素標記、原位雜交、免疫組化和電生理等手段進行研究。(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化學和生物因子（如神經(jīng)營養(yǎng)因子）等實驗條件, 觀察條件變更對神經(jīng)細胞的直接或間接作用。(4)便于從細胞和分子水平探討某些神經(jīng)疾病的發(fā)病機制，藥物或各種因素對胚胎或新生動物神經(jīng)細胞在生長、發(fā)育和分化等各方面的影響。 我們實驗室從80年代始開展了神經(jīng)細胞的體外培養(yǎng)工作，取得了一些經(jīng)驗，現(xiàn)將培養(yǎng)細胞分類及方法簡要介紹如下:

一、雞胚背根神經(jīng)節(jié)組織塊培養(yǎng)

主要用于神經(jīng)生長因子（NGF）等神經(jīng)營養(yǎng)因子的生物活性測定。在差倒置顯微鏡下觀察以神經(jīng)突起的生長長度和密度為指標半定量評估NGF的活性。

1、材料和方法 

（1）選正常受精的雞蛋，置于37℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)孵化，每日翻動雞蛋一次。

（2）取孵化8-12 d 的雞蛋, 用70% 酒精消毒蛋殼，從氣室端敲開蛋殼，用消毒鑷剝除氣室部蛋殼。

（3）用彎鑷鉤住雞胚頸部，無菌條件下取出雞胚置小平皿內(nèi)，除去頭部后，腹側向上置滅菌毛玻璃片上,用眼科彎鑷子打開胸腹腔，除去內(nèi)臟器官。

（4）在解剖顯微鏡下，小心除去腹膜，暴露脊柱及其兩側，在椎間孔旁可見到沿脊柱兩側排列的背根節(jié)（圖1），用一對5號微解剖鑷小心取出。

（5）置背根節(jié)于解剖溶液內(nèi)，用微解剖鑷去除附帶組織，接種于涂有鼠尾膠的玻璃或塑料培養(yǎng)瓶中，在DMEM無血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

2、結果

雞胚背根神經(jīng)節(jié)在含神經(jīng)生長因子(NGF, 2.5S，20ng/ml)的無血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h,神經(jīng)節(jié)長出密集的神經(jīng)突起。而未加NGF的神經(jīng)節(jié)培養(yǎng)24 h, 未見神經(jīng)突起生長。

二、新生大鼠、新生小鼠及雞胚背根神經(jīng)節(jié)分散細胞培養(yǎng)

背根神經(jīng)節(jié)（DRG）細胞起源于神經(jīng)嵴，NGF研究Levi-Montalcini的實驗表明，外原性NGF能刺激DRG細胞生長發(fā)育并形成廣泛的神經(jīng)網(wǎng)絡。在體外，分離培養(yǎng)的神經(jīng)節(jié)在NGF存在的情況下，神經(jīng)突起的生長在一天之內(nèi)可長達數(shù)毫米，因此，利用培養(yǎng)的DRG細胞，進行軸突生長發(fā)育的研究，是為經(jīng)典而常用的方法之一。

1、材料和方法 

取新生一天的大鼠(wistar種)和小鼠(昆明種)。用眼科剪在無菌條件下除去背部皮膚, 然后剪取一段脊髓,背側朝上置于滅菌毛玻璃片上,在解剖顯微鏡下沿椎管兩側水平剪除腹側一半椎骨,暴露脊髓和神經(jīng)節(jié),用解剖鑷分離出神經(jīng)節(jié)。雞胚背根神經(jīng)節(jié)的取材方法同前。 剝除神經(jīng)節(jié)被膜, 用0.125%胰蛋白酶消化(37℃ 30min)分散后用種植(Plating)培養(yǎng)液稀釋成0.2×105 個細胞/ml密度的細胞懸液，接種于涂有鼠尾膠的35mm塑料培養(yǎng)皿中,每皿2ml細胞懸液置。置標本于36℃、10%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24h后傾去培養(yǎng)皿內(nèi)種植培養(yǎng)液，改用飼養(yǎng)(Feeding)培養(yǎng)液培養(yǎng)。接種第3d, 在培養(yǎng)皿中分別加入細胞分裂抑制劑5-氟-2'-脫氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml以抑制非神經(jīng)細胞的增殖, 作用48 h后更換新鮮飼養(yǎng)培養(yǎng)液，以后每周換液兩次, 每次更換一半新鮮飼養(yǎng)培養(yǎng)液。   

2、培養(yǎng)液成份

種植培養(yǎng)液: 80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L);10%胎牛血清; 10%馬血清;NGF 20ng/ml; 谷氨酰胺100μg/ml。脫氧核糖核酸酶 I 40μg/ml。

飼養(yǎng)培養(yǎng)液: 95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3  3.7g/L,)；5 % 馬血清； NGF 20ng/ml；神經(jīng)營養(yǎng)素 1ml/100ml；谷氨酰胺100μg/ml。  

我們推薦使用小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：CM-M107）作為體外培養(yǎng)小鼠海馬神經(jīng)元細胞的培養(yǎng)基。