小鼠腎足突細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為T25瓶；細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1.產(chǎn)品名稱：小鼠腎足突細(xì)胞
2.組織來(lái)源：腎組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠腎足突細(xì)胞分離自腎組織；腎小球是腎元中的用于將血液過(guò)濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動(dòng)脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過(guò)濾速率便稱為腎小球過(guò)濾率。足細(xì)胞（podocyte）即腎小囊臟層上皮細(xì)胞，它附著于腎小球基底膜（GBM）的外側(cè)，連同GBM和毛細(xì)血管內(nèi)皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過(guò)屏障。足細(xì)胞特殊的解剖位置，使得其體內(nèi)研究較為困難；又由于正常成年機(jī)體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞，體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。足細(xì)胞呈星型多突狀，胞體較大，由胞體伸出許多突起，又稱足突（FP），呈指狀交叉復(fù)蓋于GBM外表面，并通過(guò)黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分，IV型膠原和纖維連接蛋白（FN）；在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）和組織蛋白酶，從而在GBM的代謝平衡中發(fā)揮重要作用。足細(xì)胞之間鄰近的足突相互交替，形成了許多30-40nm的裂孔，孔上覆蓋一層厚4-6nm的裂孔隔膜，即腎小球足突間裂孔隔膜。后者是血漿蛋白通過(guò)脈管系統(tǒng)的后屏障，對(duì)于維持腎小球?yàn)V過(guò)屏障結(jié)構(gòu)與功能完整性發(fā)揮關(guān)鍵作用。
本公司生產(chǎn)的采用機(jī)械研磨過(guò)不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)Nephrin、WT-1、Synaptopodin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
M199、FBS、上皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：CM-M067）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

三、使用方法
在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞可傳3-5代；建議您收到
細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽
和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培
養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待
細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml*培養(yǎng)基終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2-1:3適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*
培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和
技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)
和我們，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)
題得到解決。
5. 只可用于科研。

備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考