KCL-22；人慢性髓样白血病细胞是T25培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T25瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态（有条件可以拍下此时细胞照片）。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用，如细胞密度高于80%，可以直接消化传代，相反则加入5-6mL培养基放回培养箱继续培养即可。

1、细胞名称：KCL-22；人慢性髓样白血病细胞

2、生长特性：    □ 贴壁   （贴壁不牢容易脱落，消化无需胰酶请谨慎操作。）

3、细胞生长条件：

培养条件	90%DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S
温度	37℃
空气条件	5% CO2,100% AIR
传代方法	1:2传代，2~3天换液
冻存条件	90%FBS+10%DMSO

4.KCL-22；人慢性髓样白血病细胞背景资料：我们推荐使用AAV-293细胞株繁殖腺病毒相关重组病毒。 AAV-293源自普遍使用的 HEK293细胞株，但产生的病毒滴度更高。 HEK293细胞是剪切过的腺病毒5型DNA转染的人胚肾细胞。 跟HEK293细胞一样，AAV-293细胞反式表达腺病毒E1基因，当共转染三个AAV助质粒(一个含ITR的质粒，pAAV-RC, 和E1缺失助质粒)时，可以产生有感染力的腺病毒-相关病毒颗粒。

二．使用方法

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出25cm²培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜*培养液继续培养或进行传代。

 

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm²培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）用5-6ml*培养基轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml*培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，zui后放入37℃，5%CO₂细胞培养箱中培养；

4）待细胞*贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm²培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml*培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml*培养基重悬，接种25cm²培养瓶，于37℃，5%CO₂细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜*培养基继续培养。

T25瓶处理方法

收到后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。如有破损漏液等问题，请即时。并进行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2. 将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。

3. 预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。

4. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）。

5. ①若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上，进行传代。

②若细胞密度较大，达到80%以上，将细胞传代培养。

注：

培养瓶里的培养基血清浓度为5%，建议更换成自己配好的新鲜培养基。由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，这时请在拍照后将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基。（这里是针对原来*培养基FBS浓度是10%的情况，如果原来FBS浓度是20%，可以增加到25%FBS浓度）   收到细胞后如细胞状态不佳或培养中遇到问题，烦请当天尽快并提供图片，以便售后处理。7天内反馈，本身问题免费重发如人为原因导致可根据实际情况酌情处理；7天内未接到任何反馈视为合格，不予免费售后