miRNA熒光定量RT-PCR檢測試劑盒采用 SYBR Green I 嵌合熒光染料法的原理來進(jìn)行miRNA熒光
定量PCR檢測。

miRNA熒光定量RT-PCR檢測試劑盒是專門為miRNA定量檢測而研發(fā)的新一代預(yù)混形式的熒
光定量PCR檢測試劑。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、
MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR增強(qiáng)劑等所有PCR所需要的成分。miRNA qPCR Mix
中所含的熒光染料SYBR Green I 可以與所有的雙鏈DNA結(jié)合，使該產(chǎn)品可用
于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標(biāo)記探針。其中的Taq DNA polymerase
是經(jīng)化學(xué)修飾的高效熱啟動酶，配合*的緩沖體系，使反應(yīng)特異性更好，靈敏
度更高，并能在更廣的范圍內(nèi)對miRNA進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

miRNA具有下列特點(diǎn)：
1. 簡便、快捷完成 miRNA 的檢測。
2. 檢測通量高，只需zui少的 RNA 樣本，即可同時(shí)進(jìn)行多種目標(biāo) miRNA 的檢
測。
3. 檢測特異性好，*的 miRNA 引物設(shè)計(jì)技術(shù)及其優(yōu)化的反應(yīng)體系避免了非
特異性擴(kuò)增、特別是 Pre-miRNA 的污染。
4. 檢測分辨率高：該系統(tǒng)能分辨單堿基差異的 miRNA。
5. 檢測靈敏度高：可在低至 pg 級的總 RNA 中檢測到特異表達(dá)的 miRNA。
規(guī)格及成分 成 分 編 號 25 次包裝
2×miRNA qPCR Mix 131042A 0.75 mL
Reverse Primer(10 μM) 131042B 30 μL
RNase-Free Water 80403 1 mL
miRNA cDNA *鏈合成試劑盒 130911 25 次
使用手冊 131041sc 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。
自備試劑 樣品、qPCR 上游引物（Forward primer）等
使用方法 一、miRNA cDNA *鏈合成
請參見 miRNA cDNA *鏈合成試劑盒產(chǎn)品使用手冊。
二、miRNA 熒光定量檢測
1. 室溫融化 2×miRNA qPCR Mix 和 Reverse primer（10 μM）。
2. 使用時(shí)請將 2×miRNA qPCR Mix 上下顛倒輕輕均勻混合，避免起泡，并
經(jīng)短暫離心后使用。如果試劑沒有混勻，其反應(yīng)性能會有所下降。
3. 按照下表組分配制熒光定量 PCR 反應(yīng)體系：
試劑組分 體積
2×miRNA qPCR Mix 25 μL
Forward Primer（自備） 1 μL
Reverse Primer 1 μL
miRNA *鏈 cDNA X μL
RNase-Free Water 至 50 μL
4. 建議反應(yīng)程序設(shè)置如下：
循環(huán) 溫度 時(shí)間
1× 95℃ 10 min
40-45×
95℃ 15 s
60℃ 1 min
溶解曲線分析 根據(jù) PCR 儀要求設(shè)定
注：本產(chǎn)品所采用的熱啟動酶須在預(yù)變性 95℃、10 min 條件下實(shí)現(xiàn)酶的活化。
miRNA注意事項(xiàng) 1. miRNA *鏈 cDNA 的加入量不要超過 Real time PCR 體積 10%。
2. 對于特殊的檢測體系，高含量的 cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，根據(jù)所
檢測 miRNA 的豐度適當(dāng)?shù)南♂?cDNA（稀釋 10 倍或者 100 倍）。
3. 2×miRNA qPCR Mix 中含有 SYBR Green I 和 ROX 染料，保存本產(chǎn)品
或配制 PCR 反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 一站式柱式 miRNAOUT（CAT#:80104）