改良Lowry法蛋白定量試劑盒Folin 酚試劑（磷鉬酸和磷鎢酸混合物）跟蛋白質(zhì)中含酚氨基酸（色氨酸 和酪氨酸）發(fā)生顏色反應(yīng)，可用于測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，但靈敏度較低。Lowry 在此基礎(chǔ)上加入 Biuret（雙縮脲）反應(yīng)步驟，即先在堿性條件下使蛋白質(zhì)和 Cu+形成復(fù)合物，再使其與 Folin 酚試劑發(fā)生顯色反應(yīng)

改良Lowry法蛋白定量試劑盒Folin 酚試劑（磷鉬酸和磷鎢酸混合物）跟蛋白質(zhì)中含酚氨基酸（色氨酸 和酪氨酸）發(fā)生顏色反應(yīng)，可用于測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，但靈敏度較低。Lowry 在此基礎(chǔ)上加入 Biuret（雙縮脲）反應(yīng)步驟，即先在堿性條件下使蛋白質(zhì)和 Cu+形成復(fù)合物，再使其與 Folin 酚試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，產(chǎn)物在 750nm 檢測(cè)。 Lowry 法使不含酚的蛋白質(zhì)也能被檢測(cè)出來(lái)，靈敏度是單獨(dú)使用 Folin 酚的 10 倍左右，是雙縮脲反應(yīng)的 200 倍，因此成為早期檢測(cè)蛋白濃度的主要方法。 Lowry 檢測(cè)原理圖如下：

傳統(tǒng) Lowry 法受到很多常用的試劑（如 DTT、糖、甘油、Triton 等）干
擾，步驟繁瑣。本公司對(duì) Lowry 法進(jìn)行改良，

改良Lowry法蛋白定量試劑盒具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用，不需要單獨(dú)購(gòu)買每個(gè)成分再配制。
2. 能抵抗部分干擾物（如一定濃度 SDS 或其他去污劑）的干擾。
3. 檢測(cè)線性范圍廣，在 2-100 µg，檢測(cè)上限比經(jīng)典 Lowry 法高 30%-40%。
規(guī)格及成分 成份 編號(hào) 1000 次包裝
溶液 A 成分一 101102A1 208 mL
溶液 A 成分二 101102A2 16 mL
溶液 A 成分三 101102A3 16 mL
溶液 B 101102B 80 mL
溶液 C 101102C 80 mL
福林酚 100939 10 mL（用 100 mL 棕色瓶）
BSA 標(biāo)準(zhǔn)品
（2 mg/mL in 水） 101102D 1 mL
使用手冊(cè) 1 份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存（但 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品需要-20℃保存），有效期一年。
自備試劑 去離子水、蛋白樣品、樣品緩沖液
使用方法 一：準(zhǔn)備工作
1、 制備溶液 A：將 16 mL 溶液 A 成分二和 16 mL 溶液 A 成分三加入到裝
溶液 A 成分一的塑料瓶中，混合均勻得到 240 mL 溶液 A。注意：溶液 A
各成分分開(kāi)提供更加穩(wěn)定。
2、 制備 Lowry 工作液：將溶液 A、溶液 B 和溶液 C 按 3：1：1 的體積比混
合得到 Lowry 工作液。此工作液可以室溫放置 2-3 周，所以zui用多少
配多少。如果發(fā)現(xiàn)溶液 B 或溶液 C 有沉淀，需 37℃溶解并搖勻后再使用。
3、 制備福林酚工作液：在裝有 10 mL 福林酚的棕色塑料瓶中加入 90 mL 去
離子水，搖晃混勻待用。此工作液在避光條件下可以放置 6 個(gè)月。
二：試管法
4、 先用去離子水將 BSA 標(biāo)準(zhǔn)（2 mg/mL）稀釋到 50 ug/mL，然后在標(biāo)記
的試管中加入下列成分（單位：uL）。注意：每個(gè)樣品zui做三個(gè)稀釋度，
每個(gè)稀釋度zui設(shè)置三次重復(fù)，陰性對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品也zui做三次重復(fù)。
標(biāo)準(zhǔn)品（每個(gè)做三次重復(fù)，此處只列出一個(gè)）
編號(hào) BSA 標(biāo)準(zhǔn)
（50 ug/mL） 水 總體積
陰性對(duì)照 0 0 200
1 0 200 200
2 25 175 200
3 50 150 200
4 100 100 200
5 150 50 200
6 200 0 200
樣品（以 1 個(gè)樣品、3 個(gè)稀釋度為例，每個(gè)稀釋度三個(gè)重復(fù)，
此處只列出一個(gè)）
編號(hào) 樣品 總體積
1 200 （稀釋度 1） 200
陰性對(duì)照 1
200（用稀釋度 1 稀釋的溶解蛋
白樣品的緩沖液） 200
2 200 （稀釋度 2） 200
陰性對(duì)照 2
200（用稀釋度 2 稀釋的溶解蛋
白樣品的緩沖液） 200
3 200 （稀釋度 3） 200
陰性對(duì)照 3 200（用稀釋度 3 稀釋的溶解蛋
白樣品的緩沖液） 200
5、 每管中加入 200 uL Lowry 工作液，振蕩混勻后室溫反應(yīng) 10 分鐘。
6、 每管中加入 100 uL 福林酚工作液，振蕩混勻后室溫反應(yīng) 30 分鐘。
7、 用容量為 0.5 mL、光徑為 1 cm 的玻璃比色杯或聚苯乙烯比色杯測(cè)定 750
nm 的光吸收。測(cè)定時(shí)，先空白（即陰性對(duì)照）后樣品，測(cè)定樣品和 BSA
標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，先低濃度后高濃度。測(cè)定未知樣品前需要將杯子清洗干凈，必
要時(shí)可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。
8、 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品三個(gè)重復(fù)的平均值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)未知樣品的光吸收
從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得其對(duì)應(yīng)的濃度。
三：96 微孔板法
9、 同上，只是反應(yīng)用 96 微孔板設(shè)置，用酶標(biāo)測(cè)試儀 750 nm 測(cè)定光吸收。
四、樣品中干擾物質(zhì)的去除（本產(chǎn)品不含相關(guān)產(chǎn)品，
如果樣品中有干擾 Lowry 法蛋白定量的物質(zhì)（見(jiàn)附表），可另購(gòu)本公司的
微量蛋白質(zhì)沉淀試劑盒（CAT#:81217-50）去除，也可以用自備試劑按下法
去除：用水將樣品調(diào)到體積為 200 uL, 加入 20 uL 0.15%去氧膽酸鈉，混勻，
室溫放置 10 分鐘。加入 20 uL 72%的 TCA，室溫放置 5 分鐘。3000 g 離心
15 分鐘，小心去除上清。用 200 ul 水溶解蛋白沉淀后以用于 Lowry 法測(cè)定。
附：常見(jiàn) Lowry 法蛋白定量干擾物（低于所列濃度不干擾，高于所列濃度則
會(huì)干擾，需要按上法去除。不能含任何濃度的 DTE，DTT 和硫酸胺)。
干擾物 濃度 干擾物 濃度
Acetone 10% 2-Mercaptoethanol 1 mM
Aprotinin 10 mg/mL NaCl 1 M
CHAPS 0.05% NaOH 100 mM
DMF 10% NaPi 100 mM
DMSO 10% NP40 0.02%
EDTA 1 mM PMSF 1 mM
EGTA 1 mM SDS 1%
Ethanol 10% Sodium Citrate 100 mM
Glucose 100 mM Sucrose 7%
Glycin 100 mM Tris 10 mM
HEPES 1 mM Trition X-100 0.03%
Imidazole 25 mM Tween 20 0.05%
Methanol 10% Urea 3M
疑難解答 1. 該方法檢測(cè)的蛋白質(zhì)濃度范圍 1ug-50ug/ml。
2. 由于 Lowry 法測(cè)定的是蛋白質(zhì)中酪氨酸殘基，對(duì)于那些酪氨酸殘基數(shù)高于
或低于 BSA,其測(cè)定的蛋白質(zhì)含量將偏低或偏高。如果遇到該情況，需要
采用 BCA 或 Bradford 法測(cè)定。
3. 閱讀測(cè)定方法后化學(xué)試劑對(duì)測(cè)定方法的影響。
相關(guān)產(chǎn)品 微量蛋白質(zhì)沉淀試劑盒（CAT#:81217-50），
超敏型 BCA 法蛋白定量試劑盒（CAT#:80816）