即用型荧光定量PCR试剂盒产品是基于荧光染料检测的即用型 PCR 试剂盒，可以对基因组 DNA 靶
序列和 RNA 反转录后 cDNA 靶序列进行实时定量 PCR 分析（quantitativePCR、qPCR）。

即用型荧光定量PCR试剂盒本产品含有经过优化的缓冲液组分、优化的 Taq DNA 聚合酶、
dNTPs、MgCl2、SYBR Green I 和稳定剂等成分。本产品中优化的 Taq DNA
Polymerase 高温加热前，抗 Taq 单克隆抗体与 Taq 结合，抑制 Taq 聚合酶活
性，从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板 DNA 之间的非特异性杂交或引
物二聚体引起的非特异性扩增。而且抗体在 PCR 反应的预变性步骤中能*失
活，不会阻碍之后 Taq DNA 聚合酶的活性，大大提高了 PCR 反应的灵敏度及
特异性。
1. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行实时定量 PCR 实验。
2. 使用抗 Taq 抗体封闭的优化的 Taq DNA 聚合酶，可抑制低温条件下的非特
异性扩增。
3. 使用第三代饱和型荧光染料，信号强，不会抑制 PCR 反应。
4. 快捷，即用型的预配液使加样操作步骤大大简化，避免了交叉污染，降低实
验误差。
5. 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能检测
到浓度为 50 拷贝/mL 的靶分子。
规格及成分 成分 编号 1 mL 包装 6 mL 包装
qPCR MagicMix，2× 90408 1 mL（棕色管） 6×1 mL（棕色管）
使用手册 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存, 保存期限为 6 个月。
自备试剂 DNA 模板、引物、超纯水。
使用方法 1. 以 20 uL 的 qPCR 反应体系为例：在一干净的 PCR 管中，加入下列成分：
反应体系成分 20 uL 体系 终浓度
qPCR MagicMix，2× 10 uL 1×
自备引物一 a x uL 0.1-0.5 uM
自备引物二 a x uL 0.1-0.5 uM
自备模板 a x uL
自备 ROXb 2 uL （可以不加）
补超纯水到 20 uL
放入荧光 PCR 仪中进行扩增, 并在退火或延长步骤中记录荧光信号。
注意：
a) 通常引物浓度以 0.2 μM 可得到较好结果，可以终浓度 0.1-1.0 μM 作
为设定范围的参考；通常 DNA 模板的量以 10-100 ng 基因组 DNA 或
1-10 ng cDNA 为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不
同，可对模板进行梯度稀释，以确定*的模板使用量。
b) ROX 校正染料：如果使用 ABI 公司的 7500，7700 和 7900 三种型
号的荧光 PCR 仪器，则需用自备的 ROX 进行 Ct 值校正。对 ABI 7700
和 7900，ROX 的*浓度为 1×（即在每 20 uL 反应体系中加 2 uL
10×ROX）。对 ABI 7500， ROX 的*浓度为 0.05-0.1×（每 20
uL 反应体系加 0.1-0.2 uL 10×ROX；也可将 10×ROX 稀释到 1×，
然后每个反应体系加入 1-2 uL 1×ROX）。ROX 会在溶解曲线中产生
噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”
中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。
对于 iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000,
RotorGene3000，RotorGene 6000 和 LightCycler 480 等型号的
荧光 PCR 仪器，ROX 不是必须的，但加入的话也不会影响整个 PCR
分析。
2. 循环步骤：根据扩增子的性质和仪器性能，从以下三个过程中任选一个进行
扩增。
A：两步快速循环法：适用于引物 Tm 值设计为 60℃的反应
循环步骤 温度 时间 循环数
酶活化 95℃ 2-5 min 1
变性
退火&延伸
95℃
60℃
15 s
1 min
35-40
注意：本产品所采用的酶在预变性 95℃、2-5 min 条件下实现酶的活化。
退火温度请以 60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可适当
提高退火温度。
B：三步快速循环法：适用于延伸步骤温度高于退火步骤的 PCR（长引物
PCR）
循环步骤 温度 时间 循环数
酶活化 95℃ 2-5 min 1
变性
退火
延伸
95℃
56-64℃
72℃e
15 s
30 s
30 s
35-40
注意：退火温度：建议采用两步法 PCR，退火温度 60℃进行反应。若提高
反应特异性，可提高退火温度，以 60-64℃作为设定范围的参考。若因使用
Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR
扩增，三步法的退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。延伸温度：
延伸温度设为 72℃通?？梢蕴岣呃┰鲂?。但是，对于 AT 含量大于 70%
的扩增子来说，延伸温度设为 60℃为宜。
C：通用循环法：这种循环方法适用于几乎所有的荧光 PCR 仪，也适用于用
快速循环法不能扩增的模版。
循环步骤 温度 时间 循环数
酶活化 95℃ 5 min 1
变性
退火&延伸
95℃
60℃
15 s
60 s
35-40
3. 数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在没结合
DNA 时，zui大吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的zui大吸收光谱在 500nm，
zui大发射光谱在 530nm。
注意事项 1. 如果使用 iCycler，可以不加入 FAM。
2. 如果使用 Roche LightCycler 的玻璃毛细管进行 PCR，需加入终浓度为
0.5mg/mL 的自备 BSA。
关联产品 即用型 PCR2.0、PCR 级绿如蓝染料。