一管式双链cDNA合成试剂盒是用于一管式双链 cDNA 合成的试剂盒。cDNA *链合成的原理
是以 OligodT 为通用引物的、MMLV 催化的逆转录反应。

一管式双链cDNA合成试剂盒原理如下：
cDNA 第二链合成的原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 杂合链中的 RNA
产生切口，再用 DNA Polymerase I 通过切口平移(nick translation)反应进
行 RNA 链取代合成 cDNA 第二链，其原理图如下：
具有下列特点：
1. 即开即用，含有合成两条 cDNA 链的所有试剂。
2. 适用于含 poly rA 的 RNA，对不含 poly rA 的 RNA（如细菌 RNA），
不能使用本试剂盒制备 ds cDNA。
3. 一管式进行，*链 cDNA 合成后不需要任何处理，直接进入第二链
的合成。
4. 所得双链 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、
cDNA 文库构建、抑制性差减杂交等。
5. 本试剂盒足够 10 次 80uL 体系的双链 cDNA 合成反应。
6. 如果需要合成全长 cDNA，zui选用 SMART 全长 cDNA 双链合成
试剂盒。 规格及成分
成份 编号 10 次塑料盒包装
Oligo dT 引物 100814 10 uL
cDNA *链合成缓冲液 130308A 40 uL
MMLV 逆转录酶（200U/uL） 60905 10 uL
5×cDNA 第二链合成缓冲液 130308B 160 uL
20×cDNA 第二链合成酶混合液 130308C 40 uL
T4 DNA 聚合酶 130808D 20 uL
0.2 M EDTA 溶液 130309 40 uL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 1 份
运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。 自备试剂 mRNA 提取试剂盒
使用方法 一：mRNA 的制备
本试剂盒不提供 mRNA 提取试剂，用户需自备相关试剂。
二：双链 cDNA 的合成
1. 在一个干净的塑料离心管中，按下表设置 cDNA 合成反应：
成分 用量
自备 mRNA 样品 4 uL（0.5-2ug）
Oligo dT 引物 1 uL
70℃ 2 分钟后室温放置 2 分钟，短暂离心
cDNA *链合成缓冲液 4 uL
MMLV 逆转录酶 1 uL
轻柔吹打混匀后 42℃保温 90 分钟合成*链 cDNA
超纯水 48 uL
cDNA 第二链合成缓冲液 16 uL
cDNA 第二链合成酶混合液 4 uL
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温 2 小时
自备的 T4 DNA 聚合酶 2 uL
轻柔吹打混匀后，16℃继续保温 30 分钟
0.2M EDTA 溶液 4 uL
注：如果不需要将双链 cDNA 平末端化，则可以跳过 T4 DNA 聚合酶处理步
骤。
2. 电泳 5uL 检测 cDNA 质量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范围内呈模糊一
片，则 cDNA 合格。如果没看见 cDNA 或有其他异常，需查找原因后再
继续。
3. 所得 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、cDNA 文
库构建、抑制性差减杂交等实验。 关联产品 SMART 全长 cDNA *链合成试剂盒、一管式 SMART 全长 cDNA 双链合
成试剂盒