人穿孔素成孔蛋白酶聯免疫吸附檢測試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。zui后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現定量檢測。靶蛋白濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。

圖2. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

      一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
人穿孔素成孔蛋白酶聯免疫吸附檢測試劑盒包裝清單：
產品編號    產品名稱    包裝
PI305-1    人IL-1β抗體預包被板    8孔×12條
PI305-2    樣品分析緩沖液    5ml
PI305-3    標準品稀釋液    10ml
PI305-4    人IL-1β標準品    2-4瓶
PI305-5    人IL-1β生物素化抗體    10ml
PI305-6    辣根過氧化物酶標記Streptavidin    10ml
PI305-7    洗滌液(20X)    30ml
PI305-8    TMB溶液    10ml
PI305-9    終止液    5ml
PI305-10    封板膜(透明)    2張
PI305-11    封板膜(白色)    2張
－    說明書    1份
保存條件：
      除標準品外，4℃保存6個月內有效。標準品4℃保存，1-2周內有效，-20℃保存6個月內有效。注意TMB溶液避光保存。
注意事項：
      由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
      洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現有結晶，請室溫水浴加熱使結晶*溶解后再配制工作液。
      為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
      TMB對人體有刺激性，請注意適當防護。
      如果發(fā)現TMB辣根過氧化物酶顯色液出現混濁或顏色變成藍色，應該停止使用。
      加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
      不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經過獨立測試。
      充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
      本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致zui終檢測到的吸光度顯著下降。
      洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
      檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
      加樣過程中須避免氣泡的產生。
     僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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