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 骨髓細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備

實(shí)驗(yàn)材料骨髓液

試劑、試劑盒肝素抗凝劑PBS

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 無菌抽取骨髓液 0.5 ml。

2. 將骨髓標(biāo)本滴入含 1000 U/ml 肝素抗凝劑的 1 ml PBS 液中。

3. 再加入 PBS 液稀釋至 10 mI。

4. 用吸管吸取 5 ml 稀釋骨髓液徐徐加入盛有 4 ml 的人類淋巴細(xì)胞分離液液面之上。

5. 在以上條件下，骨髓有核細(xì)胞分層在 PBS 人類淋巴細(xì)胞分離液之間形成的界面上。

6. 吸取有核細(xì)胞層，加入到 10 ml PBS 液中，混勻。

7. 以 1000 r/min 離心 5 min，棄上清；收集骨髓細(xì)胞，加固定液或置低溫冰箱備用。

收起 

注意事項(xiàng)

1. 抽骨髓液時(shí)，先將注射器針頭、針筒、針?biāo)ㄓ酶嗡亟?，抽取時(shí)力量適中。

2. 在吸取淋巴細(xì)胞層時(shí)盡量少吸分離液，吸取量應(yīng)掌握在 300 μl 左右，這樣有利于洗去多余的分離液。

3. 溶紅細(xì)胞的方法：以等量的蒸餾水加入到沉淀中，輕輕搖動(dòng)片刻，見粉紅色出現(xiàn)，立即加入大量生理鹽水，混勻，離心，去除上清即可。

1600SiHa人子宮頸鱗癌細(xì)胞DMEM+10% FBS

1500CaSki人宮頸癌腸轉(zhuǎn)移細(xì)胞/人宮頸癌上皮細(xì)胞DMEM+10% FBS

1500MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞DMEM+10% FBS

1500SPC-A-1人肺癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1500Eca-109人食管癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1600THP-1人髓系白血病單核細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1600K562人慢性骨髓性白血病細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1500PC-3人前列腺癌細(xì)胞F-12K+10% FBS/DMEM +10% FBS

1500A549人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞F-12K+10% FBS

1800NCM460人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1500HCT-15人結(jié)腸癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1600COLO 320DM人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1500COLO 320人結(jié)腸癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1600COLO 201人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1600Caco-2人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞DMEM+20% FBS

1800BEAS-2B人支氣管上皮細(xì)胞DMEM+10% FBS

1600Raji人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1600Daudi人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1600RAMOS人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1800T84人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞DMEM/F12+10% FBS

1800c666-1人鼻咽癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

2000HepG2.2.15表達(dá)HBV病毒的人肝癌細(xì)胞MEM+10% FBS+0.4mg/ml G418

1600T47D人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1600SK-BR-3人乳腺癌細(xì)胞DMEM（高糖）+10% FBS

1500HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞McCoy’s +10% FBS

1500PLC/PRF/5人肝癌亞力山大細(xì)胞DMEM+10% FBS

1500L-02（HL-7702)人正常肝細(xì)胞DMEM+10% FBS

1500SGC-7901人胃癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1500786-O人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1500ACHN人腎癌細(xì)胞DMEM+10% FBS

1500SK-OV-3人卵巢癌細(xì)胞McCoy’s +10% FBS

1500769-P人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞RPMI-1640 + 10% FBS

1500NCI-H1299人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS

1500MKN-28（MKN-74)人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞RPMI-1640+10% FBS