化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
大豆球蛋白（Glycinin）Elisa試劑盒（競爭法）說明書
閱讀：398 發(fā)布時間：2022-10-11使用目的：
本試劑盒用于測定植物樣本中大豆球蛋白（Glycinin）的含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本中大豆球蛋白（Glycinin）水平。用純化的大豆 球蛋白（Glycinin）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入大豆球蛋白 （Glycinin），和 HRP 標記的大豆球蛋白（Glycinin）抗原，使它們競爭結(jié)合，，經(jīng)過* 洗滌后加底物 TMB 顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的大豆球蛋白（Glycinin）的含量呈負相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大豆球蛋白（Glycinin）的含量。
標本要求
1．標本處理：（1）水樣采集后經(jīng) -20℃反復凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過濾后，備查（2）組織
樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相關(guān)文獻提取進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，備查
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 加樣：分別設(shè)標準孔、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加 50 微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色215 分鐘.
7. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
8. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
檢測范圍：
20 ng/L -600 ng/L
規(guī)格：
96 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月