化工儀器網
技術文章
離子結合型果膠(ISP)含量試劑盒操作步驟
閱讀：257 發(fā)布時間：2022-4-22離子結合型果膠(ISP)含量試劑盒操作步驟
分光光度法 50管/24樣
注 意 ：正式測定前取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
果膠是構成細胞初生壁和中膠層的主要成分，主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是許多高等植物細胞壁中含量豐富的多糖成分，其*的物理、化學性質影響著植物源食品的口感和品質。果膠間以Ca2+橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環(huán)偶聯的方式交聯，通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠，如水溶性果膠（WSP）、離子結合型果膠（ISP）和共價結合果膠（CSP）。
測定原理：
利用帶有螯合劑的酸溶液提取離子結合型果膠（ISP），采用咔唑比色法測定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中與咔唑試劑進行縮合反應，生成物質在530 nm處有最大吸收峰。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、濃硫酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體50mL× 1瓶，4℃保存。
試劑二：液體50mL× 1瓶，4℃保存。
試劑三：標準液1mL× 1支，4℃保存。
試劑四：液體5 mL× 1瓶，4℃保存；
離子結合型果膠(ISP)含量試劑盒操作步驟樣品的前處理：
1、 細胞壁的提?。?/span>取約0.3g樣本，加入1mL 80％乙醇，室溫快速勻漿，95℃水浴20min，冷卻至室溫，4000g 25℃離心10min，棄上清。沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩2min左右，4000g 25℃離心10min，棄上清即可），沉淀即為粗細胞壁，加入1mL試劑一（去除淀粉）浸泡15小時，4000g 25℃離心10min，棄上清，將沉淀干燥，稱重得細胞壁物質（CWM）。
2、 ISP的提取：稱取烘干的CWM 3mg，加入1mL試劑二，充分勻漿(若烘干物質質地堅硬，可先研碎后再加入1mL試劑二勻漿，或者用勻漿器勻漿)。8000g 4℃離心10min，取上清液待測。
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至530nm處，蒸餾水調零；試劑三和試劑四37℃預熱10min以上；
2、操作表：
試劑名稱（µL） | 空白管 | 標準管 | 對照管 | 測定管 |
待測樣本 | 100 | 100 | ||
試劑三 | 100 | |||
蒸餾水 | 100 | 100 | ||
試劑四 | 100 | 100 | 100 |
混勻
濃硫酸 | 800 | 800 | 800 | 800 |
混勻95℃水浴5min后，530nm處讀取吸光值，空白管、標準管、對照管和測定管吸光值分別記為A1、A2、A3和A4。若A大于2，需將待測樣本用蒸餾水稀釋（可稀釋10倍或20倍）。空白管和標準管只要做一管，每個測定管需設一個對照管。
ISP含量計算：
ISP含量(mg /g 干重)= (C標準×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數
C標準：標準管濃度，0.05mg/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL； W：樣本干重，g。
注意：
低檢測限為50μg /g 干重
離子結合型果膠(ISP)含量試劑盒操作步驟