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RCA滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒

(Rolling Circle Amplification Kit)

Cat. No.: A3702 Size: 100T Store at:-20℃

描述：滾環(huán)擴(kuò)增（rolling circle amplification，RCA）是新近發(fā)展起來(lái)的一種恒溫核酸擴(kuò)增方法。以環(huán)狀 DNA 為模板， 通過(guò)一個(gè)短的 DNA 引物（與部分環(huán)狀模板互補(bǔ)），在 phi29 DNA  聚合酶催化下將dNTPs 轉(zhuǎn)變成單鏈DNA，此單鏈DNA包含成百上千個(gè)重復(fù)的模板互補(bǔ)片段。這種方法不僅可以直接擴(kuò)增 DNA 和 RNA，還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)靶核酸的信號(hào)放大，靈敏度達(dá)到一個(gè)拷貝的核酸分子，因此在核酸檢測(cè)中具有很大的應(yīng)用價(jià)值和潛力。本試劑盒配置的 phi29 DNA 聚合酶具有鏈置換和連續(xù)合成特性，可連續(xù)合成長(zhǎng)達(dá)70kb 的DNA 片段。另外，該酶具有 3’→5’外切酶校讀功能，合成的 DNA 片段保真性高。試劑盒配備的 Random Hexamers 為 6 堿基隨機(jī)引物可對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行指數(shù)放大（通常放大 10000 倍）。組分

儲(chǔ)存：-20℃可保存 3 年。

操方法

1. 配置反應(yīng)液

 10×phi29 Buffer 2.5 μl 10mM dNTP Mixture 2 μl

 25XRandom Hexamers 1 μl

模板 DNA 0.01-20 ng

ddH₂O up to 25 μl

2. 變性退火

將上述產(chǎn)物置于 PCR 上，93°C 變性 3min，25°C 5min。

• 向上述退火產(chǎn)物中加入 0.5μl phi29 DNA Polymerase 和0.2μl Yeast Pyrophosphatase，混合均勻后放置到 30°C 反應(yīng) 2~16h（根據(jù)所需的產(chǎn)物量進(jìn)行反應(yīng)時(shí)間調(diào)整，通常分別在 2h、5h、16h 進(jìn)行電泳確認(rèn)）。

4. 反應(yīng)結(jié)束后 65°C 10min 進(jìn)行失活反應(yīng)。

注意：

RCA 擴(kuò)增還可應(yīng)用于其它缺刻或診斷相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)， 此時(shí)

Random Hexamer 為非