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細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中，其應(yīng)用越來越廣泛。那么，羅氏應(yīng)用科學(xué)部都有哪些轉(zhuǎn)染試劑，其優(yōu)勢都有哪些？本期帶大家走進羅氏轉(zhuǎn)染試劑的多*。

 

 X-tremeGENE 9 DNA 轉(zhuǎn)染試劑   

簡介：

X-tremeGENE 9 DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑，溶于80%乙醇中，經(jīng)0.2 μm濾膜過濾，然后封裝于玻璃小瓶中，適用于細(xì)胞分析的多種實驗。

優(yōu)勢：

1.具有細(xì)胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高，生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。

2.操作簡便、節(jié)省時間，只需對X-tremeGENE 9 DNA轉(zhuǎn)染試劑進行簡單稀釋，再與質(zhì)粒DNA共同孵育，即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可)。

3.對于常用細(xì)胞無需進行費時費力的優(yōu)化工作。

 

 X-tremeGENE HP DNA 轉(zhuǎn)染試劑   

簡介：

X-tremeGENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑，兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，可用于轉(zhuǎn)染各類真核細(xì)胞(包括昆蟲細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。

優(yōu)勢：

1.簡單易用的多組分混合試劑，無動物源性成分，室溫穩(wěn)定。

2.高轉(zhuǎn)染效率，對于原代細(xì)胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的腫瘤細(xì)胞系有高轉(zhuǎn)染效率。

3.使用細(xì)胞毒性低的試劑，結(jié)果相關(guān)性好。

圖2. X-tremeGENE HP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過X-tremeGENE HP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)高于X-tremeGENE HP，導(dǎo)致存活細(xì)胞量減少(圖片來源于網(wǎng)絡(luò))。

圖3. X-tremeGENE HP對難轉(zhuǎn)細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效果優(yōu)于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法。應(yīng)用GFP編碼的質(zhì)粒對人/鼠間充質(zhì)干細(xì)胞進行轉(zhuǎn)染。XHP 3:1表示用X-tremeGENE HP及相應(yīng)的轉(zhuǎn)染試劑(μl): 質(zhì)粒DNA (μg)比例進行轉(zhuǎn)染(圖片來源于網(wǎng)絡(luò))。

 

 X-tremeGENE siRNA 轉(zhuǎn)染試劑   

簡介：

X-tremeGENE siRNA轉(zhuǎn)染試劑一種優(yōu)化的多組分低毒試劑，能夠向多種常用細(xì)胞系有效遞送小干擾RNA(siRNA)作用于序列特異的目標(biāo)基因，引發(fā)基因表達下調(diào)或基因沉默。

優(yōu)勢：

1.在多種不同類型細(xì)胞中基因敲除效率超過90%。

2.高靈活應(yīng)用， 同一試劑可用于siRNA和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的基因沉默實驗。

3.細(xì)胞毒性低，結(jié)果相關(guān)性好，確保所觀察到的細(xì)胞效應(yīng)是由轉(zhuǎn)染的siRNA而非轉(zhuǎn)染過程本身介導(dǎo)。

4.兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基)。

圖4. X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent用于4種細(xì)胞系的HPRT基因沉默實驗。根據(jù)各試劑說明書建議的操作流程，或標(biāo)準(zhǔn)實驗方法，將100nM HPRT特異性siRNA轉(zhuǎn)染至4種細(xì)胞。 通過LightCycler® h-HPRT Housekeeping Gene Set的熒光定量法評估基因沉默效率。結(jié)果顯示X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent在四種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。