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葡萄糖氧化酶（GOD）試劑盒
閱讀：366 發(fā)布時(shí)間：2020-11-23測(cè)定意義
GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動(dòng)物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產(chǎn)生 H2O2， 是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。
測(cè)定原理
GOD 催化產(chǎn)生 H2O2，過(guò)氧化物酶在有氧存在時(shí)催化 H2O2分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧 化生成有色物質(zhì)，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系。
葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）試劑盒說(shuō)明書
微量法 100 管/96 樣
正式測(cè)定前取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動(dòng)物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產(chǎn)生 H2O2，
是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。
測(cè)定原理
GOD 催化產(chǎn)生 H2O2，過(guò)氧化物酶在有氧存在時(shí)催化 H2O2分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧
化生成有色物質(zhì)，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系。
試驗(yàn)中所需的儀器和設(shè)備
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 19.2mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體 1mL×1 支，4℃保存；
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備
組織處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，
加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
血清（漿）：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 500nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 GOD 檢測(cè)工作液的配制：用時(shí)將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中，充分混勻，待用；
用不完的試劑 4℃可保存一周；
3、測(cè)定前將 GOD 檢測(cè)工作液在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。
4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本和 240μL 工作液，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄
500nm 下 20s 吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2。計(jì)算 ΔA＝A2-A1。
GOD 活力單位的計(jì)算
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）GOD 活力的計(jì)算
單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。
GOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109
]÷V 樣÷T=3333×ΔA
2、動(dòng)物組織 GOD 活力的計(jì)算
（1）按蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。
GOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109
]÷(V 樣×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。
GOD（nmol/min/ g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109
]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T=3333×ΔA÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2.5×10-4
L；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺摩爾消光系數(shù)，7.5×103
L / mol
/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1
mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）GOD 活力的計(jì)算
單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。
GOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109
]÷V 樣÷T=6666×ΔA
2、動(dòng)物組織 GOD 活力的計(jì)算
（1）按蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。
GOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109
]÷(V 樣×Cpr)÷T=6666×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。
GOD（nmol/min/ g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109
]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T=6666×ΔA÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2.5×10-4
L；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺摩爾消光系數(shù)，7.5×103
L / mol
/cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，
1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。