化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
血清總鐵結(jié)合能力測試盒
閱讀：297 發(fā)布時間：2020-11-10測定意義：
血清總鐵結(jié)合能力指血清轉(zhuǎn)鐵蛋白可結(jié)合鐵的能力，其含量高低與缺鐵性貧血、急性肝炎等 疾病的發(fā)生密切相關(guān)。
測定原理：
Fe2+與菲洛嗪反應(yīng)形成紫紅色化合物，在 562nm 處有特征吸收峰。堿性條件下，血清轉(zhuǎn)鐵蛋 白可以與 Fe3+結(jié)合，剩余未結(jié)合的 Fe3+可以被還原成 Fe2+，此時吸光度 A1 與未結(jié)合 Fe3+數(shù) 量正相關(guān)；酸化后，轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的 Fe3+釋放，并且進(jìn)一步被還原成 Fe2+ ，此時吸光度 A2 與總 Fe3+數(shù)量正相關(guān)。A2 減 A1 與 TIBC 濃度呈正比。
血清總鐵結(jié)合力(Total Iron Binding Capacity，TIBC)試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
血清總鐵結(jié)合能力指血清轉(zhuǎn)鐵蛋白可結(jié)合鐵的能力，其含量高低與缺鐵性貧血、急性肝炎等
疾病的發(fā)生密切相關(guān)。
測定原理：
Fe2+與菲洛嗪反應(yīng)形成紫紅色化合物，在 562nm 處有特征吸收峰。堿性條件下，血清轉(zhuǎn)鐵蛋
白可以與 Fe3+結(jié)合，剩余未結(jié)合的 Fe3+可以被還原成 Fe2+，此時吸光度 A1 與未結(jié)合 Fe3+數(shù)
量正相關(guān)；酸化后，轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的 Fe3+釋放，并且進(jìn)一步被還原成 Fe2+ ，此時吸光度 A2
與總 Fe3+數(shù)量正相關(guān)。A2 減 A1 與 TIBC 濃度呈正比。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。（臨用前根據(jù)用量將 A 液和 B 液按 1:1 混合）
試劑四：液體 7mL×1 瓶，4℃保存。
測定操作表：
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 562nm。
2、操作表
對照管 測定管
血清（μL） 40
試劑一（μL） 320 280
試劑二（μL） 40 40
混勻，37℃，10min
試劑三（μL） 40 40
混勻，37℃，5min，對照管調(diào)零，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板測定 562nm 處吸光值
A1，測完后立即加入試劑四
試劑四（μL） 60 60
混勻，37℃，5min，對照管調(diào)零，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板測定 562nm 處吸光值
A2。ΔA=A2-A1。
血清總鐵結(jié)合力計(jì)算公式：
總鐵結(jié)合能力定義：37℃條件下，每升血清結(jié)合 Fe3+的 μmol 數(shù)。
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.5478x+0.0281，R
2
=0.9981
總鐵結(jié)合能力 TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.5478×V 反總÷V 樣= 20.99×（ΔA-0.0281）
b. 用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.2739x+0.0281，R
2
=0.9981
總鐵結(jié)合能力 TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.2739×V 反總÷V 樣= 41.98×（ΔA-0.0281）
V 反總：反應(yīng)總體積，0.46mL；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.04mL
注意事項(xiàng)：
1. 吸光值大于 0.8，樣品適當(dāng)稀釋再測定，注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2. 試劑二、試劑三有一定的毒性，操作時請做好防護(hù)措施。
3. 檢測限為 4.78μmol/L。