化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
果膠酯酶測試盒
閱讀：255 發(fā)布時間：2020-11-9植物淀粉含量試劑盒說明書
微量法 100 管/96 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
淀粉是植物中糖的主要儲存形式，其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝
都有重要意義。
測定原理：
利用 80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，進(jìn)一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖，
采用蒽酮比色法測定葡萄糖含量，即可計算淀粉含量。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、濃
硫酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 35mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；
淀粉提?。?br />1、 稱取 0.1~0.2g 樣本（建議稱取約 0.1g 樣本）于研缽中研碎，加入 1mL 試劑一，充分勻
漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀。
2、 沉淀中加入 0.5mL 蒸餾水，放入 95℃水浴中糊化 15min（蓋緊，以防止水分散失）。
3、 冷卻后，加入 0.35mL 試劑二，25℃常溫提取 15min，振蕩 3-5 次。
4、 加入 0.85mL 蒸餾水，混勻，3000g，25℃離心 10min，取上清液待測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 620nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度。
3、工作液的配制：臨用前在試劑三中加入 3.75mL 蒸餾水后，緩慢加入 21.25mL 濃硫酸，
不斷攪拌，充分溶解，待用；用不完的試劑 4℃保存一周；
4、樣本測定：取50μL樣本和250μL工作液至EP管中，95度水浴10 min（蓋緊，防止水分散
失），自然冷卻至室溫，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，在620 nm 波長下記錄測
定吸光度值A(chǔ)。
淀粉含量計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 5.872x - 0.0295；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。
1、按照蛋白濃度計算
淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr
2、按樣本鮮重計算
淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1] ÷5.872÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1.7 mL；Cpr：樣本蛋白
質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 2.936x - 0.0295；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。
1、按照蛋白濃度計算
淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936 ÷(V1×Cpr)=0.34×(A+0.0295) ÷Cpr
2、按樣本鮮重計算
淀粉含量(mg/g 鮮重)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936÷(W×V1÷V2) =0.578×(A+0.0295) ÷W
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1.7 mL；Cpr：樣本蛋白
質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意：由于工作液具有強(qiáng)腐蝕性，請謹(jǐn)慎操作。
若吸光值大于1，請將樣本用提取液稀釋后再測定，計算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
提取液的配置：0.35mL 試劑二+1.35mL 水。用多少按照此比例配多少。
低檢測限為 10μg/g 鮮重或 100ng/mgprot。