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谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）測(cè)試盒
閱讀：466 發(fā)布時(shí)間：2020-11-6谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書
微量法 100 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
GPT（EC 2.6.1.2）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化氨基酸和酮酸轉(zhuǎn)氨
基反應(yīng)，在氨基酸代謝中具有重要作用。此外，哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞 GPT 活性很高，當(dāng)肝細(xì)胞
壞死，GPT 釋放到血液中，血清 GPT 活性顯著增高。因此，GPT 被世界衛(wèi)生組織推薦為肝
功能損害敏感的檢測(cè)指標(biāo)。
測(cè)定原理
GPT 催化丙氨酸和 α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，生成丙酮酸和谷氨酸；加入 2,4-二硝基苯
肼溶液，不僅終止上述反應(yīng)，而且與酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在堿性條件
下呈紅棕色，可以在 505nm 讀取吸光值并計(jì)算酶活力。
試驗(yàn)中所需的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 2.5 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：液體 2.5 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑三：液體 25 mL×1 瓶，4℃保存；
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提
取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；
8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，
加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 505nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 在 EP 管或在 96 孔板中加入下列試劑
試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管
待測(cè)樣本 10
試劑一 25 25
混勻后，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）預(yù)熱 30min
試劑二 25 25
待測(cè)樣本 10
混勻后，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）準(zhǔn)確反應(yīng) 20min
試劑三 240 240
混勻，室溫（25℃）放置 10min，在 505nm 波長(zhǎng)處測(cè)各管吸光度。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一
個(gè)對(duì)照管。
計(jì)算
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、以相對(duì)吸光值（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)酶活力單位（U/L）為縱坐標(biāo)。作
標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.482
2、血清中 GPT 活力(U/L)= 0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ 為 A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。
3、微生物、細(xì)胞或組織中 GPT 活力(U/g 蛋白)=0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待測(cè)勻
漿蛋白濃度（g/L）。χ 為 A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。
b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、以相對(duì)吸光值（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)酶活力單位（U/L）為縱坐標(biāo)。作
標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.964
2、血清中 GPT 活力(U/L)= 0.964×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ 為 A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。
3、微生物、細(xì)胞或組織中 GPT 活力(U/g 蛋白)=0.964×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待測(cè)勻
漿蛋白濃度（g/L）。χ 為 A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。