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如何看流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果中的圖
閱讀:1021 發(fā)布時(shí)間:2020-9-22
Q1:坐標(biāo)軸的意義?
1、 單參數(shù)直方圖
每一個(gè)細(xì)胞單參數(shù)的測(cè)量數(shù)據(jù)可以整理成統(tǒng)計(jì)分布,以直方圖的方式來(lái)顯示。在圖中,橫坐標(biāo)表示熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度的值,其單位是道數(shù)(channel),可以是線形(line)或者對(duì)數(shù)(log)??v坐標(biāo)一般是相對(duì)細(xì)胞/粒子數(shù)(count)!
2、 二維圖
在二維圖的中,橫坐標(biāo)/縱坐標(biāo)都表示熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度的值,可以是線形(line)或者對(duì)數(shù)(log)。雙參數(shù)圖可以將樣品細(xì)胞群分開(kāi),從而方便對(duì)感興趣的細(xì)胞進(jìn)行分析。
Q2:“Gate”和 “Regin”?
設(shè)門是流式細(xì)胞分析中一種重要的技術(shù),只有通過(guò)佳的設(shè)門方式,才能準(zhǔn)確地獲取和分析數(shù)據(jù),從而得到臨床診斷和科研中有價(jià)值的信息。
On-line gating(threshold gating)監(jiān)測(cè)/獲取數(shù)據(jù)
Off-line gating: 分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 散射光設(shè)門/熒光設(shè)門 散射光/熒光聯(lián)合設(shè)門
多重邏輯門(組合門)多重邏輯門 G3=R1 and R2 (G3=R1×R2)
其它: G=R1 or R2 G=R1 not R2Q3:流式圖中的顏色與熒光顏色?
流式圖中的顏色為區(qū)分不同細(xì)胞群而人為, 與熒光顏色無(wú)關(guān)!!
Q4:流式圖中的陰/陽(yáng)(N/P)如何劃分?
如何做M1陰性界限?實(shí)際上,這個(gè)M1的劃分*是根據(jù)陰性(同型)對(duì)照來(lái)的!如下圖:左圖為同型對(duì)照,即:您所檢測(cè)的物質(zhì)在陰性組中的基礎(chǔ)表達(dá)量,可以理解為背景、靜息狀態(tài)下、基礎(chǔ)水平、未受刺激時(shí)等。右圖即陽(yáng)性組,也就是接受刺激后,功能狀態(tài)下、藥物作用后等。
Q5: 這么巧,陰性正好在101劃分??
其實(shí), 我們可以人為地將電壓,放大倍數(shù)調(diào)到相應(yīng)的大小,使陰性的右邊界在某一個(gè)值上,(通常劃在101附近)這樣后期做sample時(shí)好看!當(dāng)然也可以調(diào)到102,103次方。
Q6:為什么要進(jìn)行熒光補(bǔ)償?
流式細(xì)胞分析中經(jīng)常要用到2種以上的熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行染色,而目前所使用的多種熒光染料發(fā)射譜間有一定重疊。
“熒光補(bǔ)償”這個(gè)術(shù)語(yǔ)是指修正熒光滲漏的過(guò)程,如從探測(cè)器除去除匹配熒光以外的任何熒光信號(hào)。