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貼壁細(xì)胞需要用到一種特定的試劑——蛋白酶，其作用是切斷細(xì)胞和容器之間，細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互粘連，用蛋白酶處理細(xì)胞的過程叫做「消化」，「消化」之后的下?lián)軙?huì)形成單細(xì)胞并從容器底部掉下來。常用的蛋白酶是胰蛋白酶。

材料準(zhǔn)備：

1、預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS 液和胰蛋白酶的瓶子放入 37℃ 水浴鍋內(nèi)預(yù)熱；
2、用 75% 酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手；
3、正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且減少污染；
4、點(diǎn)燃酒精燈：注意火焰不能太小。

傳代流程：

1. 取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺(tái)內(nèi)。
2. 從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意培養(yǎng)瓶取出細(xì)胞時(shí)要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺(tái)面，再在鏡下觀察細(xì)胞。
3. 將培養(yǎng)瓶放入超凈工作臺(tái)后打開瓶口，同時(shí)要在酒精燈上燒口消毒。
4. 加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用 PBS 清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞較好好，消化溫度是 37℃。
5. 顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時(shí)細(xì)胞消化適度。
6. 棄去胰蛋白酶液，加入新鮮的培養(yǎng)液終止反應(yīng)。小心吹打成細(xì)胞懸液。
7. 將細(xì)胞懸液吸入 10 ml 離心管中。平衡后將離心管放入離心機(jī)中，以 1000 rpm/min 離心 5 min。
8. 棄去上清液，加入適當(dāng)體積的培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。
9. 將細(xì)胞懸液吸出分裝至 2 - 3 個(gè)培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。
10. 顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要時(shí)計(jì)數(shù)。注意密度過小會(huì)影響傳代細(xì)胞的生長(zhǎng)，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于 5×105 /ml。后要做好標(biāo)記。
11. 繼續(xù)培養(yǎng)：用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入 CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細(xì)胞 2 - 4 h 后開始貼附在瓶壁上。