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甲型肝炎病毒 RT-PCR 檢測(cè)試劑盒
閱讀：338 發(fā)布時(shí)間：2019-8-19產(chǎn)品及特點(diǎn)
甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus，HAV)會(huì)引起甲型肝炎，該病毒病毒主要通過(guò)糞、口途徑傳播，傳染源多為病人。甲型肝炎的潛伏期為 15～45 天，易感群體多為兒童及青年，發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)而遞減，感染后臨床表現(xiàn)多從發(fā)熱、疲乏和食欲不震開始，繼而出現(xiàn)肝腫大、壓痛、肝功能損害，部份患者可出現(xiàn)黃疸。該病毒的感染對(duì)人體健康有較大損害，因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，可用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測(cè)甲型肝炎病毒。它具有下列特點(diǎn)：
1.一站式，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對(duì)照。
2.根據(jù)甲型肝炎病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。
3.靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4.使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產(chǎn)品足夠 50 次 30μL 體系的 RT-PCR。
規(guī)格及成份
注：為避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供甲型肝炎病
毒專一的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽(yáng)性對(duì)照需要跟其他成分分
開放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假?yáng)性。
自備試劑
樣品 RNA
使用方法
一、樣品 RNA 的制備
1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 甲型肝炎病毒 PCR 陽(yáng)性
對(duì)照的 10000 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當(dāng)于 1 萬(wàn)拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備TE 溶液中，充分混勻，此為 100倍稀釋液。再取 10μL 此稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 10000 倍稀釋液）再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）。可以用水作為制備的陰性對(duì)照。制備所得成為樣品RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 20 次天凈沙核酸釋放劑試用裝，其使用手冊(cè)可以從本公司網(wǎng)站搜索天凈沙核酸釋放劑或產(chǎn)品編號(hào) 61202 下載。
二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）
2. 如果有 N+2 個(gè)樣品，則標(biāo)記 N+4 個(gè)PCR 管（額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是 RT-PCR
陽(yáng)性對(duì)照，另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
成份 | N+2 個(gè) 樣品管 | RT-PCR 陰性對(duì)照 | RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
甲型肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 個(gè)制備的樣品 | 各 12.5 μL | 不加 | 不加 |
甲型肝炎病毒 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照 10000 倍稀釋液 | 不加 | 不加 | 12.5 μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4.上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
逆轉(zhuǎn)錄 | 42℃ | 60 分鐘 |
預(yù)變性 | 95℃ | 5 分鐘 |
PCR 反應(yīng) （35 個(gè)循環(huán)） | 95℃ | 30 秒 |
55℃ | 30 秒 | |
72℃ | 30 秒 | |
延伸 | 72℃ | 5 分鐘 |
5.瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果，陽(yáng)性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為 192bp。如果陰性對(duì)照有此擴(kuò)增產(chǎn)物或陽(yáng)性對(duì)照無(wú)此擴(kuò)增產(chǎn)物，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒(méi)有此擴(kuò)增產(chǎn)物、陽(yáng)性對(duì)照有此擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有此擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽(yáng)性，如果無(wú)則為陰性。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 甲型肝炎病毒可視化 RT-LAMP 檢測(cè)試劑盒
本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。