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技術(shù)文章

細(xì)胞膜流動性測定實驗

閱讀:1720          發(fā)布時間:2019-2-15

膜結(jié)構(gòu)中的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)具有相對側(cè)向流動性;細(xì)胞膜是由磷脂雙分子層和鑲嵌、貫穿在其中及吸附在其表面的蛋白質(zhì)組成的,磷脂雙分子層疏水的尾部在內(nèi),親水頭部在外。
實驗方法原理    常用于研究膜脂流動性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)。DPH摻入到細(xì)胞膜脂烴鏈區(qū)后,介質(zhì)粘度增加,順反異構(gòu)受到抑制,成為能發(fā)光的全反構(gòu)型。
實驗材料    腫瘤細(xì)胞
試劑、試劑盒    磷酸鹽緩沖液DPH
儀器、耗材    熒光分光光度計離心機(jī)
實驗步驟    
1.  取對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞,以pH7.2,0.01 mol/l 磷酸鹽緩沖液洗滌兩次。

2.  取107個細(xì)胞,離心,加入2×106 mol/l DPH溶液2 ml。

3.  25℃振蕩溫育30 min,再以PBS洗滌1次。

4.  懸浮于4 ml PBS溶液中。

5.  測定儀器為熒光分光光度計,在激發(fā)波長362 nm,發(fā)射波長432 nm,狹縫10條件下測定熒光強(qiáng)度。
注意事項    
由于DPH可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,后來又合成了其陽性離子衍生物1-(4-三苯基)-6-苯基-1,3,5-己三烯(TMDPH)。TMDPH不能透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,因此,理論上TMDPH標(biāo)記法較DPH標(biāo)記法更能準(zhǔn)確的反映膜脂流動性。

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