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細(xì)胞生長曲線實(shí)驗(yàn)
閱讀：582 發(fā)布時間：2019-1-14實(shí)驗(yàn)方法原理
細(xì)胞生長曲線是測定細(xì)胞生長數(shù)的常用方法，是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)。一般細(xì)胞傳代之后，經(jīng)過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進(jìn)入大量分裂的指數(shù)生長期。為了準(zhǔn)確描述整個過程中細(xì)胞數(shù)目的動態(tài)變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數(shù)生長期，呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部分。細(xì)胞生長曲線的測定一般可利用細(xì)胞計數(shù)法進(jìn)行。
實(shí)驗(yàn)材料 細(xì)胞
試劑、試劑盒 D-Hanks液牛血清RPMI1640雙抗0.08%胰酶
儀器、耗材 凈化工作臺離心機(jī)恒溫水浴箱冰箱倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱吸管培養(yǎng)瓶吸頭 槍頭24培養(yǎng)板膠塞微量加樣槍紅血球計數(shù)板
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞，采用一般傳代方法進(jìn)行消化，制成細(xì)胞懸液。
2. 計數(shù)，地將細(xì)胞分別接種于21～30個大小一致的培養(yǎng)瓶內(nèi)或培養(yǎng)孔（以24孔培養(yǎng)板為宜），每瓶或孔細(xì)胞總數(shù)要求一致，加入培養(yǎng)液的量也要一致。
3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，計算均值。培養(yǎng)3～5 d 常要給未計數(shù)的細(xì)胞換液。
4. 以培養(yǎng)時間為橫軸，細(xì)胞數(shù)為縱軸（對數(shù)），描繪在半對數(shù)座標(biāo)紙上，連接成曲線后即成該細(xì)胞的生長曲線。
收起
注意事項(xiàng)
1. 細(xì)胞生長曲線雖然為常用，但有時其反映數(shù)值不夠，可有20～30%的誤差，需結(jié)合其它指標(biāo)進(jìn)行分析。
2. 現(xiàn)在很多實(shí)驗(yàn)室利用培養(yǎng)板采用MTT法進(jìn)行生長曲線測定，較為簡便。
其他
1. 標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞生長曲線近似“S”形，一般在傳代后天細(xì)胞數(shù)有所減少，再經(jīng)過幾天的潛伏適應(yīng)期，然后進(jìn)入對數(shù)生長期，達(dá)到平臺期后生長穩(wěn)定，后到達(dá)衰老。
2. 在生長曲線上細(xì)胞數(shù)量增加1倍時間稱為細(xì)胞倍增時間，可以從曲線上換算出。