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小心翼翼還是養(yǎng)不好細胞？師兄說了一個讓我驚呆的原因
閱讀：526 發(fā)布時間：2018-9-29
細胞培養(yǎng)基成分復雜，包括鹽類、糖類、維生素、氨基酸、代謝前體、生長因子、激素和微量元素。對這些物質的需求因細胞而有差異，這也導致大量的不同培養(yǎng)基配方出現(xiàn)。主要碳源物質通常是葡萄糖，有時也會使用半乳糖代替，這是因為半乳糖的代謝速度較慢。氨基酸（尤其是 L - 谷氨酰胺）和丙酮酸鹽也可作為碳源。
除了營養(yǎng)成分，培養(yǎng)基也會幫助維持培養(yǎng)體系的 pH 和滲透壓。pH 的維持依靠一種或多種緩沖液體系，常見的包括 CO2/NaHCO3、磷酸鹽和 HEPES 等，血清也可以作為*培養(yǎng)基的緩沖液。
1、碳酸氫鈉和 CO2
細胞的存活和生長，需要 CO2 同時也會產生少量 CO2。在培養(yǎng)基中加入 CO2 可以與 HCO3?形成平衡，所以很多種類的培養(yǎng)基會通過 CO2/HCO3? 體系平衡 pH。CO2 直接溶解在培養(yǎng)基中并形成 H2CO3。隨著細胞代謝并產生更多的 CO2，培養(yǎng)基 pH 下降并導致下面的化學平衡向右移動：
H2O + CO2←→ H2CO3 ←→H+ + HCO3?
理想的 pH 范圍是 7.2～7.4，可以通過補充 NaHCO3 和調節(jié)上層空氣中的 CO2 水平來維持，化學過程如下：
H2O+CO2+NaHCO3←→H++ Na+ + 2HCO3?
組織培養(yǎng)時，細胞可能在開放體系中（培養(yǎng)基上層空氣和培養(yǎng)箱中空氣可以自由交換）生長，也可能在封閉體系中（培養(yǎng)基上層空氣和培養(yǎng)箱中空氣相互隔離）生長。培養(yǎng)基中的緩沖體系需要與這些培養(yǎng)方式匹配，否則細胞狀態(tài)會由于代謝壓力而變差。
在開放體系中培養(yǎng)細胞時，可通過控制空氣濕度（可以減少培養(yǎng)基蒸發(fā)）和 CO2 的調節(jié)方式（如果培養(yǎng)基含 NaHCO3）來維持 pH。在開放體系中，需要含更高 NaHCO3 濃度的 Earle's 平衡鹽溶液，并且由培養(yǎng)箱維持 5～10% CO2。通常，1.2～2.2g/L NaHCO3 配合 5% CO2，3.7 g/L NaHCO3 配合 10% CO2。的計量因培養(yǎng)基配方而不同。
除了 Leibovitz's L-15 (ATCC No.30-2008)，ATCC 所有培養(yǎng)基都要匹配 5% CO2。絕大多數(shù) ATCC 培養(yǎng)基含 1.5g/L NaHCO3 以及額外的丙酮酸鈉。而 Gibco Hyclone 很多品牌的培養(yǎng)基里都含有 3.7 g/L NaHCO3，因此應該匹配 10% CO2。
2、HEPES
HEPES 和其他有機緩沖液可以有效調節(jié)培養(yǎng)基 pH，適用于多種細胞系。實際上，某些標準培養(yǎng)基配方包含 HEPES。但是，HEPES 可能會有毒性，尤其是對某些已分化細胞，所以使用前需首先評估其效果。
3、酚紅
酚紅可作為培養(yǎng)基的 pH 指示劑。酚紅在低 pH 時顯示黃色，在高 pH 時則顯示紫色。絕大多數(shù)組織培養(yǎng)時，pH 為 7.4，應顯示為微紅色。
4、L - 谷氨酸鈉
L - 谷氨酰胺是所有哺乳動物細胞和昆蟲細胞的必需氨基酸。與其它氨基酸相比，L - 谷氨酰胺在液體培養(yǎng)基中更不穩(wěn)定。因此，為了延長保質期，商品化的液體培養(yǎng)基中經常不添加 L - 谷氨酰胺。這種情況下，使用前要先無菌加入 L - 谷氨酰胺。由于在干燥狀態(tài)下比較穩(wěn)定，所以絕大多數(shù)干粉培養(yǎng)基中都已預添加 L - 谷氨酰胺。
5、非必須氨基酸
所有培養(yǎng)基配方包含十種必需氨基酸，同時包括半胱氨酸、谷氨酰胺和酪氨酸。在一些培養(yǎng)基配方中包含其他非必需氨基酸 (丙氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，甘氨酸，谷氨酸，脯氨酸，絲氨酸)，降低了細胞的代謝負擔，有利于細胞增殖。
培養(yǎng)條件的變化，有可能改變細胞系的特性。來自于不同廠家的培養(yǎng)基，即使名字相同或類似，配方也略有差異。為了保證培養(yǎng)基一致性，如果購買 ATCC 細胞，建議使用 ATCC 原裝培養(yǎng)基。所以，接下來告訴你一個好消息。