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考馬斯藍(lán)染色法原理

閱讀:588          發(fā)布時(shí)間:2018-8-9

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Bradford法檢測蛋白濃度專題

考馬斯亮藍(lán)法也稱考馬斯藍(lán)染色法(coomassie blue staining)又稱Bradford法。由于其突出的優(yōu)點(diǎn),正得到越來越廣泛的應(yīng)用。

考馬斯藍(lán)染色法原理

考馬斯亮藍(lán)G-250(Coomassie brilliant blue G-250)測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色,大光吸收在488nm;當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?,蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合在2min左右的時(shí)間內(nèi)達(dá)到平衡,完成反應(yīng)十分迅速;其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。該法是1976年Bradford建立,試劑配制簡單,操作簡便快捷,反應(yīng)非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質(zhì)含量,測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0~1 000μg/mL,小可測2.5μg/mL蛋白質(zhì),是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。

考馬斯亮藍(lán)有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍(lán)G250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速,常用來作為蛋白質(zhì)含量的測定??捡R斯亮藍(lán)R250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。

注意:

考馬斯亮藍(lán)和皮膚中蛋白質(zhì)通過范德華力結(jié)合,反應(yīng)快速,并且穩(wěn)定,無法用普通試劑洗掉。待一兩周左右,皮屑細(xì)胞自然衰老脫落即可無礙。

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