组蛋白H3上赖氨酸27的三甲基化（H3K27me3）与植物和动物发育及疾病过程中的转录抑制密切相关。这种修饰由多梳抑制复合体2（PRC2，由EZH2甲基转移酶催化）维持，并可通过赖氨酸去甲基化酶（如JMJD3）去除。  

以兔为宿主制备的针对组蛋白H3在赖氨酸27位点三甲基化（H3K27me3）的多克隆抗体，使用KLH偶联的合成肽作为免疫原。 

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience销售产品Anti-H3K27me3多克隆抗体。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

Anti-H3K27me3多克隆抗体：

克隆性：多克隆  

宿主物种/表达系统：兔  

纯化方法：亲和纯化  

形式：水溶液  

配方：含有0.05%叠氮化物和0.05% ProClin 300的PBS缓冲液  

浓度：50 ?g/34 ?l  

免疫原：合成肽  

储存/稳定性 

在-80°C下可保存长达2年。分装以避免反复冻融。分装后可在-20°C下保存至少一个月。  

染色质免疫沉淀（ChIP）实验结果 

使用针对H3K27me3的抗体（产品编号25244）和优化的qPCR引物组合，在人HeLa细胞中进行ChIP实验。实验使用了100万细胞的剪切染色质?？固逵昧刻荻任?、2、5和10 ?g/次ChIP实验，并进行了分析。以2 ?g/IP的IgG作为阴性免疫沉淀对照。定量PCR使用了活性基因EIF4A2和GAPDH的启动子引物作为阴性对照，以及非活性基因MYT1和TSH2B的编码区引物作为阳性对照。图1显示了回收率，以输入量的百分比表示（免疫沉淀DNA与输入DNA的相对量，经qPCR分析后得出）。这些结果与H3K27me3主要存在于非活性基因中的观察结果一致。  

ChIP-seq实验结果 

使用1 ?g针对H3K27me3的抗体（产品编号25244），在100万HeLaS3细胞的剪切染色质上进行ChIP实验。随后，免疫沉淀的DNA在Illumina HiSeq测序仪上进行分析。文库制备、簇生成和测序均按照制造商说明进行。51 bp的标签通过BWA算法与人类基因组比对。图2显示了在染色体6上围绕TSH2B基因（箭头所示；图2A）、染色体20上围绕MYT1基因（图2B）以及染色体2和3（图2C和D）的基因组区域的富集情况。  

抗体滴度测定 

为了测定抗体滴度，使用针对H3K27me3的抗体（产品编号25244）进行ELISA实验，抗体进行梯度稀释。使用的抗原是含有目标组蛋白修饰的肽段。通过绘制吸光度与抗体稀释度的关系图（图3），估计抗体的滴度为1:3,500。  

交叉反应性测试 

使用针对H3K27me3的抗体（产品编号25244）进行点杂交分析，测试其与其他修饰的组蛋白H3和H4肽段以及未修饰的H3K27序列的交叉反应性。将含有相应组蛋白修饰的肽段（100至0.2 pmol）点在膜上，抗体稀释度为1:5,000。图4显示抗体对目标修饰具有高特异性。请注意，抗体也能识别S28磷酸化的修饰。  

Western Blot分析 

使用针对H3K27me3的抗体（产品编号25244），对HeLa细胞的全细胞裂解物（25 ?g，泳道1）和组蛋白提取物（15 ?g，泳道2）进行Western Blot分析，同时分析1 ?g的重组组蛋白H2A、H2B、H3和H4（分别对应泳道3、4、5和6）?？固逶诤?%脱脂奶粉的TBS-Tween中稀释1:500。右侧标记了目标蛋白的位置，左侧显示了分子量标记（单位：kDa）。  

免疫荧光分析 

小鼠NIH3T3细胞用针对H3K27me3的抗体（产品编号25244）和DAPI进行染色。细胞用4%甲醛固定10分钟，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100进行封闭。细胞用H3K27me3抗体（左侧）在封闭液中稀释1:200进行免疫荧光标记，随后用与Alexa488偶联的抗兔抗体进行二抗标记。中间图显示了DAPI对细胞核的染色。右侧图显示了两种染色的合并图像。  

应用 

ChIP/ChIP-seq（1 ?g/ChIP）  

ELISA（1:200）  

点杂交（1:5000）  

Western Blot（1:500）  

免疫荧光（1:200）  

运输温度：-20°C或-80°C  

物种反应性：人  

备注：每次免疫沉淀的抗体优良用量应由终端用户确定。建议测试1 - 5 ?g/次。  

注意事项：避免反复冻融。  

科学分类：抗体  

监管状态：仅限研究使用

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现a。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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