重组HEK293细胞表达狨猴（Macaca fascicularis）GPRC5D（孤儿G蛋白偶联受体，C类群5成员D，登录号XP_005570250.1），受CMV启动子控制。

背景

孤儿G蛋白偶联受体，C类群5成员D（GPRC5D）是一种s黄酸诱导蛋白，具有七个跨膜片段和一个短的N末端细胞外区域。GPRC5D在多发性骨髓瘤细胞中的强烈和选择性表达，与B细胞成熟抗原（BCMA）的表达模式相似，使其成为治疗多发性骨髓瘤的有希望的靶点。预计GPRC5D将成为多发性骨髓瘤免疫疗法中CAR T细胞的替代靶点。

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应用

1. 狨猴GPRC5D结合实验；筛选GPRC5D配体和抗体。

2. 作为抗GPRC5D CAR-T开发的靶细胞。

细胞解冻

1. 在37°C水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将小瓶的全部内容转移到含有10 ml预热的解冻培养基1（不含潮霉素B）的试管中。在37°C水浴中放置细胞过久将导致活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在5 ml预热的解冻培养基1（不含潮霉素B）中重悬。

3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基1（不含潮霉素B），并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好传代。

5. 细胞应在w全融合前传代。在s次传代及后续传代中，使用生长培养基1C（含潮霉素B）。

细胞传代

1. 抽去培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% y酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1C并转移到试管中。以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在含潮霉素B的生长培养基1C中重悬。按照每周1:5的期望亚培养比例将细胞种入新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽去培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% y酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1C并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在4°C冷冻培养基（BPS Bioscience #79796，或10% DMSO + 90% FBS）中重悬，细胞浓度约为2 x 10^6个细胞/ml。

4. 将1 ml的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下保存过夜。

5. 次日将小瓶转移到液氮中保存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10个小瓶以备将来使用。

图1. 利用流式细胞仪分析狨猴GPRC5D HEK293细胞系表面GPRC5D的表达。

狨猴GPRC5D HEK293细胞（蓝色）或对照HEK293细胞（绿色）使用GPRC5D APC偶联抗体（R&D Systems, #FAB6300A）染色，并通过流式细胞仪分析GPRC5D的表达。

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Products Catalog # Size

GPRC5D (Cynomolgus) CHO Cell Line 78338 2 vials

GPRC5D CHO Cell Line 78337 2 vials

GPRC5D HEK293 Cell Line 78345 2 vials

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