您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
8
淺談GIBCO胰酶的具體配置方法
GIBCO胰酶是一種自豬胰中提取的多種酶的混合物，主要為胰蛋白酶、胰淀粉酶與胰脂肪酶。其通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞間結(jié)合處蛋白降解，這時(shí)細(xì)胞由于自身部細(xì)胞骨架的力作用下成為球形，從而使細(xì)胞分開。作用時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度、作用ph等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。配制時(shí)不能用含鈣、鎂離子的平衡液，否則影響活性。那么我們來看看GIBCO胰酶的具體配置方法：
1、培養(yǎng)液配制，方便好用，對細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解
2、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值7.2到7.4（①胰酶（1：250）2.5克②EDTA-Na0.3克③NaCl8.0克④KCl0.4克⑤Glucose1.0克⑥PhenolRed0.005克⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí)，調(diào)pH7.8-8.0，過濾除菌。）
3、pbs（0.1%胰酶溶液的配制：稱取胰酶粉末0.1g，先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀，然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過夜，過濾滅菌，分裝，4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中，先用少許D-Hanks平衡鹽溶液（pH7.2左右）調(diào)成糊狀，然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液，攪拌混勻，置室溫4小時(shí)或冰箱過夜，并不斷攪拌振蕩；2.次日，先用濾紙粗濾，再進(jìn)行過濾除菌，分裝入瓶中，低溫冰箱保存?zhèn)溆茫Ｓ脻舛葹?.25%或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至7.2左右。）
一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌，至于作用效果，需要消化一次細(xì)胞感覺一下，因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣，有的作用溫和，有的作用劇烈。
4、是否需要四度放置過夜，取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高，所以難以溶解，需要四度過夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高，就沒有必要四度過夜。從理論上來說，四度放置過夜，給細(xì)菌生長的機(jī)會，盡管過濾可以出去細(xì)菌，可是出不掉其代謝產(chǎn)物。