氨基酸分析儀是一種科學(xué)儀器，主要用于測(cè)定蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑中氨基酸的組成和含量。其工作原理主要基于陽(yáng)離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生以及光度法測(cè)定的離子交換色譜法。氨基酸分析儀的優(yōu)勢(shì)包括高分析效率、操作簡(jiǎn)便、應(yīng)用廣泛等。
氨基酸分析儀工作原理的詳解：
1. 樣品預(yù)處理：
- 在進(jìn)行分析前，需要將蛋白質(zhì)或肽樣品水解成單個(gè)氨基酸。
2. 離子交換分離：
- 氨基酸分析儀使用裝有陽(yáng)離子交換樹脂的色譜柱。當(dāng)樣品中的氨基酸混合物在流動(dòng)相(緩沖溶液)的推動(dòng)下通過(guò)色譜柱時(shí)，各氨基酸與樹脂中的交換基團(tuán)進(jìn)行離子交換。
- 由于不同氨基酸的交換能力不同，使用不同pH值的緩沖溶液進(jìn)行洗脫可以實(shí)現(xiàn)氨基酸的分離。
3. 柱后衍生反應(yīng)：
- 分離的氨基酸與茚三酮試劑反應(yīng)生成紫色或黃色化合物。這一步驟稱為柱后衍生。
4. 光度法定量測(cè)定：
- 衍生后的氨基酸用可見光檢測(cè)器在特定波長(zhǎng)(如570 nm或440 nm)下檢測(cè)吸光度。
- 根據(jù)朗伯-比爾定律，有色產(chǎn)物的吸收強(qiáng)度與氨基酸濃度之間存在線性關(guān)系，從而實(shí)現(xiàn)定性和定量分析。
5. 系統(tǒng)優(yōu)化：
- 相比普通高效液相色譜儀(HPLC)，氨基酸分析儀針對(duì)氨基酸分析進(jìn)行了細(xì)節(jié)優(yōu)化，如氮?dú)獗Ｗo(hù)、惰性管路、在線脫氣、洗脫梯度及柱溫梯度控制等。
6. 兩種系統(tǒng)：
- 細(xì)分為蛋白水解分析系統(tǒng)(鈉鹽系統(tǒng))和游離氨基酸分析系統(tǒng)(鋰鹽系統(tǒng))。
- 鈉鹽系統(tǒng)適用于快速分析約25種以內(nèi)的氨基酸，而鋰鹽系統(tǒng)則能分析約50種氨基酸但速度較慢。
氨基酸分析儀的優(yōu)勢(shì)：
1. 高分析效率：
- 可以同時(shí)處理多批試樣，大幅度提高實(shí)驗(yàn)室工作效率。
2. 操作簡(jiǎn)便：
- 自動(dòng)化程度高，自動(dòng)完成進(jìn)樣、分離、檢測(cè)等步驟，減輕實(shí)驗(yàn)人員負(fù)擔(dān)。
3. 應(yīng)用廣泛：
- 適用于生物化學(xué)研究、醫(yī)藥研發(fā)、農(nóng)業(yè)、食品工業(yè)等多個(gè)領(lǐng)域。
4. 高靈敏度與準(zhǔn)確性：
- 能夠精確測(cè)定微量氨基酸含量，滿足高分辨率分析要求。
5. 數(shù)據(jù)可易于處理：
- 原始數(shù)據(jù)易于計(jì)算機(jī)處理，方便進(jìn)一步分析與評(píng)估。
6. 無(wú)需衍生化：
- 某些方法不需要對(duì)氨基酸進(jìn)行柱前或柱后衍生，簡(jiǎn)化了操作步驟。
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