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液相色譜柱使用經(jīng)驗談

閱讀:307        發(fā)布時間:2020/4/21
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  液相色譜柱在使用前,建議要進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*佳條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。
 
  1、樣品的前處理:
 
  a、建議使用流動相溶解樣品。
 
  b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
 
  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
 
  2、流動相的配制:
 
  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
 
  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
 
  b、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
 
  c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
 
  d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,建議使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
 
  e、流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。
 
  f、在流動相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
 
  液相色譜柱的保存
 
  1.反相色譜柱每天實驗后的保養(yǎng):
 
  使用緩沖液或含鹽的流動相,實驗完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。
 
  2.長期保存色譜柱:
 
  如色譜柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑或柳硫汞)中,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度*好是室溫。
 

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