間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含酚紅）

貨號：B01096

規(guī)格：500mL 

產(chǎn)品概述

間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基是根據(jù)UltraGRO™-Advanced添加劑適配的一款化學(xué)成分明確、無異種動物源成分的培養(yǎng)基。各種營養(yǎng)成分相互搭配特別適合用于人間充質(zhì)干細(xì)胞（包括臍帶，脂肪，骨髓等來源）的無血清條件下原代分離及傳代培養(yǎng)，具備保持間充質(zhì)干細(xì)胞的多項(xiàng)分化潛能及維持其良好的增殖速率的特性。

產(chǎn)品特點(diǎn)

?無動物源、無蛋白、wan全化學(xué)成分限定的培養(yǎng)基

?適應(yīng)多種人間充質(zhì)干細(xì)胞，包括臍帶，脂肪，骨髓等來源

?GMP生產(chǎn)，全進(jìn)口原料，批間差異小

?無需包被培養(yǎng)板，可用于原代細(xì)胞分離及傳代

?經(jīng)過低內(nèi)毒素和微生物檢測

產(chǎn)品詳情

使用說明

間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）wan全培養(yǎng)基配制

將UltraGRO™-Advanced添加劑（貨號HPCFDCRL50）在37℃水浴wan全融化，按體積1:19加入到間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，輕輕混合均勻，即為間充質(zhì)干細(xì)胞wan全培養(yǎng)基。

注：原代分離推薦使用青霉素-鏈霉素溶液（貨號B03002），其他代次不推薦使用。

原代間充質(zhì)干細(xì)胞分離

1、 手術(shù)臺上取正常剖宮產(chǎn)健康新生兒臍帶，浸泡于含青霉素-鏈霉素溶液的wan全培養(yǎng)基中，4℃保存。

2、超凈臺內(nèi)取出臍帶，用DPBS（貨號B02001）洗去臍帶殘留血液，剪成3-4cm小段。

3、用DPBS清洗一次，用組織鑷去除臍帶中的2條臍動脈。

4、 沿臍靜脈將臍帶剪開，用組織鑷刮去靜脈，留下華通氏膠（Whalton’s Jelly）。

5、 將已除去臍動靜脈的臍帶，放入DPBS中清洗2-3次，剪成1.5mm左右大小。

6、 將剪好的臍帶均勻鋪于培養(yǎng)皿或T75培養(yǎng)瓶中，間隔5mm左右。

7、 靜置5-10分鐘后，加入wan全培養(yǎng)基，放置于二氧化碳培養(yǎng)箱中（條件為5%CO₂、37℃）。

8、 培養(yǎng)3天后，鏡下觀察有無細(xì)菌污染，進(jìn)行半量換液。

9、 細(xì)胞培養(yǎng)至7-10天可見長梭形細(xì)胞從組織塊內(nèi)爬出，7天進(jìn)行全換液。

10、培養(yǎng)至12-15天可見大量細(xì)胞爬出，此時(shí)爬出的細(xì)胞記為P0。

11、待組織塊周邊細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%左右時(shí)，0.25%胰酶消化液（貨號B03003或B03001）消化細(xì)胞進(jìn)行傳代。并記為P1，以此類推。

間充質(zhì)干細(xì)胞傳代

1、待細(xì)胞融和度達(dá)到約80-90%進(jìn)行傳代（注：細(xì)胞不能太密集，否則容易分化），吸棄培養(yǎng)皿或瓶中培養(yǎng)基。

2、加適量DPBS輕輕沖洗1次。

3、加入0.25%胰酶消化液，室溫作用。

4、顯微鏡下觀察細(xì)胞wan全脫落后，用移液器輕輕吹打細(xì)胞，使細(xì)胞wan全脫落。

5、若使用B03001胰酶消化液，500g離心10min。若使用B03003胰酶消化液則無需離心，直接進(jìn)行步驟7。

6、棄上清，用wan全培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞。

7、按照6000-8000個細(xì)胞/cm²的密度進(jìn)行傳代，例如T175培養(yǎng)瓶中加入25mL細(xì)胞懸液。

8、均勻鋪在培養(yǎng)皿或瓶底部，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

9、每2-3天更換一次wan全培養(yǎng)基，并記為P2、P3等。

間充質(zhì)干細(xì)胞凍存

1、待細(xì)胞融合度達(dá)到80-90%左右時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

2、收集細(xì)胞，將細(xì)胞團(tuán)重懸在1mL無血清細(xì)胞凍存液（貨號B04001）中。

3、裝入凍存管，無需程序降溫可直接-80℃冰箱保存1年。

注：如需轉(zhuǎn)入液氮罐中長期凍存，可在-80℃保存一天后轉(zhuǎn)入液氮罐中。

注意事項(xiàng)

1、MSC分離時(shí)確保組織塊始終貼壁，換液動作要輕柔，避免沖動組織塊。

2、MSC分離過程中尤其是初期更換培養(yǎng)基量不宜過多，以免組織塊漂浮。

3、本產(chǎn)品基于UltraGRO™-Advanced添加劑開發(fā)，適配性非常好，可直接使用。

4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5、本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究使用，不得用于診斷或治療。