BioProE細(xì)胞凍存液（不含蛋白、DMSO和血清）使用方法

BioProE細(xì)胞凍存液基于控冰凍存技術(shù)，由明確化學(xué)成分組成，不含有胎牛血清和動(dòng)物源成分、DMSO、和其他蛋白質(zhì)類物質(zhì)。自主研發(fā)控冰保護(hù)成分能夠使細(xì)胞復(fù)蘇后存活率達(dá)到90%以上。目前已驗(yàn)證的常用細(xì)胞系包括CHO、HEK 293、NS-1、5637、A549、HUH7、HepG2、VERO、MDCK、293T、marc-145、pk-15。也可用于常見(jiàn)原代細(xì)胞的冷凍保存。

細(xì)胞凍存步驟

1、常規(guī)方法收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期且細(xì)胞活率大于90%的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞置于離心管中。

2、根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存細(xì)胞數(shù)。

3、將離心管放入離心機(jī)中以1,000rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘。離心后吸棄上清液，保留細(xì)胞沉淀。

4、加入1-2mL的細(xì)胞凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度約為 5×10⁵ -1×10⁷ /ml。輕柔地混勻細(xì)胞，制成細(xì)胞混合液。

5、分裝于已標(biāo)記的凍存管中。

6、直接放入-80℃超低溫冰箱中，可保存一年。

7、如果想長(zhǎng)期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天時(shí)間，方可移至液氮罐中保存。

凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1、從-80℃冰箱或液氮中取出凍存的細(xì)胞，立即置于37℃水浴鍋中快速融化。

2、待凍存管中的細(xì)胞混合液wan全融化后轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管中，立即加入等體積的細(xì)胞wan全培養(yǎng)基與細(xì)胞混合，1,000rpm離心5分鐘，移除上清液，收集細(xì)胞沉淀。

3、加入適量的wan全培養(yǎng)基，沿著管壁緩緩加入細(xì)胞沉淀中，輕柔混勻，將混勻好的細(xì)胞移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。

4、鏡檢觀察，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后可進(jìn)行其他研究或者培養(yǎng)處理。