同位素標記定量

iTRAQ（isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）&TMT（Tandem Mass Tags）分別由AB Sciex公司和Thermo公司研發(fā)的多肽體外標記定量技術，利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端或者賴氨酸側鏈基團，不同分子量的試劑對不同來源的樣品進行標記從而實現不同樣品間蛋白質組的比較。

iTRAQ/TMT試劑由三部分組成：報告基團、平衡基團和反應基團。反應基團形成2-10種等質量同位素標簽。iTRAQ/TMT試劑標記酶解后的肽段，可與氨基酸N端及側鏈的伯胺基團發(fā)生反應。在一級譜圖中，來自于不同樣本的同一肽段，標記后表現為相同的質荷比。在二級譜圖中，報告基團、平衡基團和反應基團之間的鍵斷裂，帶不同同位素標簽的同一肽段產生質量不同的報告離子，根據報告離子的豐度可獲得樣本間相同肽段的定量信息，再經過軟件處理得到蛋白質的定量信息。

iTRAQ實驗步驟

1. 樣品制備

2. 酶解消化

3. iTRAQ標記：

4. 樣本混合/肽段分級

5. 數據處理及生信分析

結果展示

火山圖

實驗周期及交付標準

1. 實驗周期：6周左右

2. 交付標準：蛋白定量結果、鑒定結果、質譜原始數據、生信分析結果（GO分析、KEGG分析等等）

需確認的信息

1. 樣本的種屬

2. 樣本的類型（組織or細胞or血液）

3. 樣本的數量及分組

4. 分析要求