Seahorse XF 細胞線粒體壓力測試

 全面了解線粒體功能

1、實驗背景

 安捷倫 SeahorseXF 細胞線粒體壓力測試通過在 Seahorse XFe 和 XF 細胞外流量分析儀上直接測量細胞的氧消耗速率（OCR）來表征線粒體功能的關鍵參數(shù)。它是基于培養(yǎng)板的活細胞實驗，能夠實時監(jiān)測 OCR。   

   實驗使用 XF 傳感器探針板內置的加藥孔在實驗過中將呼吸作用的調節(jié)劑加入細胞孔中，從而得到反映線粒體功能的關鍵參數(shù)。實驗試劑盒里的調節(jié)劑為寡霉素（Oligomycin），羰基氰-4（三氟甲氧基）苯腙（Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy)Phenylhydrazone，FCCP），魚藤酮（Rotenone）和（Antimycin A）。

圖1  安捷倫SeahorseXF細胞線粒體壓力測試曲線，展示線粒體功能的關鍵參數(shù)

圖 2  安捷倫 SeahorseXF 細胞線粒體壓力測試 ETC 的調節(jié)劑，闡述電子傳遞鏈（ETC）復合物，并顯示 Seahorse XF細胞線粒體壓力測試試劑盒包含的所有調節(jié)劑的作用靶點。

寡霉素抑制 ATP 合酶（復合物 V），是實驗中在基礎測量之后第一次注射的化合物。它影響或減少通過 ETC 的電子流，導致線粒體呼吸或 OCR  減少。減少的 OCR 與細胞 ATP 的產(chǎn)生相關。

羰基氰-4(三氟甲氧基)苯腙（FCCP）是一個解偶聯(lián)劑，它破壞質子梯度和線粒體膜電位。它是寡霉素后第二次注射的化合物。加入的結果是，通過ETC的電子流不受限制，復合物IV耗氧量達到最大。FCCP激發(fā)的OCR可用來計算備用呼吸能力，它的定義是最大呼吸和基礎呼吸的差值。備用呼吸能力衡量細胞對增加的能量需求或壓力的反應能力。

第三次注射的是復合物I的抑制劑魚藤酮和復合物III的抑制劑xxx的混合物。它們聯(lián)合關閉了線粒體呼吸，從而能夠計算由線粒體外的過程驅動的非線粒體呼吸。