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小鼠結(jié)腸癌細胞MC38培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

閱讀:2178      發(fā)布時間:2022-9-14
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  小鼠結(jié)腸癌細胞MC38培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
 
  1、準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,GIBCO,貨號11965-092),90%;胎牛血清,10%。
 
  2、培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
 
  3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
 
 

小鼠結(jié)腸癌細胞MC38
 

 

  小鼠結(jié)腸癌細胞MC38細胞處理:
 
  1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
 
  2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
 
  對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
 
 ?。?)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
 
 ?。?)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
 
  (3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
 
 ?。?)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
  3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
 
  小鼠結(jié)腸癌細胞MC38注意事項:
 
  1、收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
 
  2、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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