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基因型E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal[malB+]K-12(λS)

簡要說明BL21是最早開發(fā)的用于原核表達的菌株，BL21（DE3）、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達菌株均來源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達，不含T7RNA聚合酶，所以不能用于由T7啟動子驅動的蛋白表達(如：pET系列)；但含有大腸桿菌RNA聚合酶，可以用于tac或trc等使用大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達（如：pGEX，pMAL質粒）。 BL21感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率達107cfu/μg。

 操作說明

 1.取100μl冰上融化的BL21感受態(tài)細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞最好在冰上融化。

2. 混入質粒時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

4. 誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。