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详细介绍
公司产品仅用于科研
细胞生物学研究有以下几个方面：
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括：
①细胞核、染色体以及基因表达的研究；
②生物膜与细胞器的研究；
③细胞骨架体系的研究；
④细胞增殖及其调控；
⑤细胞分化及其调控；
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)；
⑦细胞的起源与进化；
⑧细胞工程.
产品属性：
中文名称：Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒
英文名称：Calcein-AM/PI Double Stain Kit
产品规格：500T
发货周期：1～3天
商品介绍：
Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发绿色荧光（Ex=490nm, Em=515nm）。因其在传统的Calcein（钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后，Calcein-AM（本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和CFDA)相比，由于Calcein, AM细胞毒性极低，是适合用于活细胞染色的荧光探针，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。 由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此，Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI）等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535 nm, Em=617 nm），因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545 nm激发，仅可观察到死细胞。 本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的双重染料，来进行活细胞和死细胞的双重染色标记，从而进行活细胞和死细胞水平的分析。根据我司优化的实验体系，单次就200μl细胞悬液进行染色。 注意事项 1）由于Calcein-AM对湿度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。 2）碘化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作时一定要注意防护。若接触到皮肤，需要立即用自来水清洗。 3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 储存条件：-20℃，有效期12个月 |
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
谷半胱连接催化亚基(GCLC)英文名称：GCLC ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白11抗体包装500mg
谷半胱连接(GCLM)英文名称：GCLM ELISA Kit中心体蛋白55kDa抗体包装5ml
孤啡肽(OFQ)英文名称：OFQ ELISA Kit富含半胱与表皮生长因子样蛋白2抗体包装1g
高铁血红蛋白还原(MHBR)英文名称：MHBR ELISA Kit骨架相关蛋白2/肿瘤和微管相关蛋白抗体包装5g
高迁移率族蛋白1(HMG1)英文名称：HMG1 ELISA Kit染色质修饰蛋白4B(4C)抗体包装1g
高密度脂蛋白(HDL)英文名称：HDL ELISA Kit磷化非受体酪激c-Abl抗体包装250mg
高分子量激肽原(HMWK)英文名称：HMWK ELISA Kit磷化非受体酪激c-Abl抗体包装1g
高尔基蛋白73(GP73)英文名称：GP73 ELISA Kit磷化非受体酪激c-Abl抗体包装5g
干细胞因子受体(SCFR)英文名称：SCFR ELISA Kit酪蛋白激1γ2抗体包装10MG
干细胞因子(SCF)英文名称：SCF ELISA Kit柯萨奇病蛋白受体B抗体包装100g
干扰诱导T-细胞α亚族趋化剂(ITαC)英文名称：ITαC ELISA Kit肿瘤抑制因子FBW7抗体包装25g
干扰调节因子3(IRF3)英文名称：IRF3 ELISA Kit粘附分子4抗体包装5g
干扰γ诱导单核因子(MIγ)英文名称：MIγ ELISA Kit钙调蛋白结合转录激活因子1抗体包装10g
干扰γ(IFNγ)英文名称：IFNγ ELISA Kit周期依赖性激5激活结合蛋白C53抗体包装5g
干扰β(IFNβ)英文名称：IFNβ ELISA Kit着丝粒蛋白H抗体包装1g
中甸隔指孢Dactylella│zhongdianensis 质量规格：>99%,BR载脂蛋白C3试剂盒乙酰蒲公英萜;Taraxeryl ac
枯草芽孢杆菌Bacillus│subtilis 质量规格：HPLC>98%,标准品载脂蛋白C2试剂盒异古伦宾;IsocoluMbin
暂未定名Cystofilobasidium│infirmominiatum 质量规格：进分,Sigma C1768载脂蛋白C1试剂盒;6-Hydroxyindole
Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒炭弯曲嗜酸 2-氯-3-氟-4-吡啶叉头框蛋白O磷酸化Elisa
枯草芽孢杆 3-(4-甲基哌-1-基)苯胰岛受体磷酸化Elisa
根瘤 2-溴-5-酚烟碱型乙酰胆碱受体Elisa
副猪嗜血杆 血卟啉单甲艰难梭BElisa
水黏结杆 多烯紫杉三水合物PAD-3 AbElisa
灰略红链霉 3-甲磺酰氨基苯酸抗氨甲?；鞍卓固錏lisa
细链格孢 (3R,4R)-3-氨基-4-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯异性脑炎特异性IgM抗体Elisa
大肠埃希氏 二乙基二硫代氨酸钠高香草酸Elisa
藤仓赤霉 4,4,5,5,5-五氟-1-戊帕金森氏病2ParkinElisa
嗜麦芽黄单胞 3-氟-2-甲生长停滞基因CElisa
罗伦隐球酵母 匹伐他汀钙CD63分子Elisa
大肠杆 6-溴-3,4-二氢-2H-异喹啉-1-酮白球蛋白样受体亚家族A成员3Elisa
黑曲霉 2-氨基-6-氯苯鼠疫F1抗体Elisa
无氧芽孢杆 2-三氟甲基-4-内皮转化Elisa
枯草芽孢杆 顺-六氢异林金黄色葡萄球Elisa
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