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详细介绍
产品属性：
中文名称：Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂盒
英文名称：Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
产品规格：50次
发货周期：1～3天
公司产品仅用于科研
商品介绍：
本试剂盒是一种采用Annexin-PE与7-AAD双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所*的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。7-AAD是一种核酸染料，可进入死细胞内与DNA结合，能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色。7-ADD与PI有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的佳替代品，因此通常将Annexin V-PE与ADD配合染色，以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。 操作步骤： 1、细胞样品的准备： a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。 b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。 2、用去离子水按1:3稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去离子水)。 3、用250μl Binding Buffer重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml。 4、取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。 5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。 6、在反应管中加400μl PBS，流式细胞仪(FACS)分析。 Jurkat细胞用顺铂诱导凋亡后用Annexin V-PE/7AAD双染流式分析图谱 储存条件：2～8℃，避光保存 |
细胞生物学研究有以下几个方面：
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括：
①细胞核、染色体以及基因表达的研究；
②生物膜与细胞器的研究；
③细胞骨架体系的研究；
④细胞增殖及其调控；
⑤细胞分化及其调控；
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)；
⑦细胞的起源与进化；
⑧细胞工程.
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将1mm3左右大??；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
抗促状腺受体抗体(TRAb)英文名称：TRAb ELISA Kit腺相关病5 VP1抗体包装5MG
抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)英文名称：α-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit脂肪脱氢抗体包装100g
抗Smith抗体(Sm)英文名称：Sm ELISA Kit抗利尿激1A抗体包装25g
卷曲螺旋域结合蛋白80(CCDC80)英文名称：CCDC80 ELISA Kit抗利尿激受体1B抗体包装5g
巨噬细胞移动因子(MIF)英文名称：MIF ELISA Kit二磷腺苷核糖基化因子鸟嘌呤核苷交换因子2抗体包装1g
巨噬细胞移动抑制因子(MIF)英文名称：MIF ELISA Kitα增强子结合蛋白1抗体包装5g
巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)英文名称：MIP-5 ELISA Kit脊髓小脑共济失调10抗体包装250mg
巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)英文名称：MIP-3β/ELC/CCL19 ELISA Kit蛋白激A锚定蛋白7抗体包装1g
巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)英文名称：MIP-3α/CCL20 ELISA Kit腺苷三磷结合盒转运体12抗体包装5g
巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)英文名称：MIP-2 ELISA Kit腺苷三磷结合盒转运体9抗体包装25g
巨噬细胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)英文名称：MIP-1δ/CCL15 ELISA Kit三磷腺苷结合盒转运蛋白4抗体包装5g
巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)英文名称：MIP-1β/CCL4 ELISA Kit肌动蛋白结合蛋白LIM3抗体包装100g
巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP1α)英文名称：MIP1α ELISA Kit高尔基复合体相关蛋白1抗体包装25g
巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)英文名称：MDC/CCL22 ELISA Kit乙酰羧化1ACCα抗体包装100mg
巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)英文名称：M-CSF ELISA Kit腺嘌呤核苷转运蛋白1、2、3、4抗体包装1g
磷化蛋白激B抗体促肾上腺皮质激(ACTH)L-685458是一种有效的淀粉样β蛋白前体γ分泌抑制剂, IC50为17 nM,比作用于其他天冬酰蛋白选择性高50-100倍。
Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂盒小单孢 3-氯-5-多巴D2受体检测试剂盒
ATP 荧光仪 3-溴-4-氧代-1-羧酸叔丁酯多功能蛋白聚糖检测试剂盒
大肠埃希 3-溴-5-氯苯甲多环芳烃-DNA加合物检测试剂盒
乳酒假丝酵母 3-溴-5-氟苯甲多聚ADP核糖聚合酶检测试剂盒
南海区交替红色杆 N,N-二甲基硫代氢?；榛撬崮贫嗯涮宓鞍拙厶?检测试剂盒
路氏肠杆 6-硝基-2-甲多效生长因子检测试剂盒
枯草芽孢杆 环酸叶酯多形核白弹性蛋白酶检测试剂盒
融粘帚霉 4-氟-3'-二苯多药耐药相关蛋白检测试剂盒
F56（蘑菇） 4-甲氧基邻苯二甲酸多药耐药相关蛋白1检测试剂盒
黄薄芝 异丁酸乙基香兰酯恶性肿瘤特异性生长因子检测试剂盒
食苯芽胞杆 2-氮杂双环[2.2.1]-5-庚烯-2-羧酸叔丁酯腭肺鼻上皮癌相关蛋白检测试剂盒
大肠埃希 2-氨基-5-甲氧基苯甲酰儿茶酚 检测试剂盒
肉色曲霉 四丁基铵儿茶酚抑素检测试剂盒
中温富盐 N-苄氧羰基乙二氧化酶检测试剂盒
深褐褶 2-氯-6-吡啶-3-二级组织趋化因子检测试剂盒
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
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