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详细介绍
商品介绍：
本试剂盒是一种采用Annexin V-FITC与PI双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所*的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)不能通过完整的活细胞，但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色， 因此通常将Annexin V与PI配合染色， 以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。 操作步骤： 1、细胞样品的准备： a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。 b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。 2、用去离子水按 1:3 稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去离子水)。 3、用 250μl Binding Buffer重新悬浮细胞，调节其浓度为 1×106/ml。 4、取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/FITC 和 10μl 20μg/ml的PI溶液。 5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。 6、在反应管中加 400μl PBS，流式细胞仪(FACS)分析。 储存条件：2～8℃，避光保存 |
以下是细胞生物学试剂的详细介绍：
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit | 50次 | 1～3天 |
操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
公司产品仅用于科研细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)英文名称：PCNA ELISA Kit肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体包装5ml
抗(AT)英文名称：AT ELISA Kit蛋白激A2抗体包装1g
抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)英文名称：PA-IgG/M/A ELISA Kit血管紧张Ⅱ受体2抗体包装5g
抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)英文名称：ACA-IgM ELISA KitASH1蛋白抗体包装100g
抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)英文名称：ACA-IgG ELISA Kit芳香乙酰脱乙?；鞍?抗体包装25g
抗心磷脂抗体IgA(ACA-IgA)英文名称：ACA-IgA ELISA Kit血管内皮迁移蛋白抗体包装5g
抗心肌抗体(AMA)英文名称：AMA ELISA Kit糖还原相关蛋白质抗体包装100g
抗小核糖核蛋白/Sm抗体(snRNP/Sm)英文名称：snRNP/Sm ELISA Kit胆汁结合蛋白DDH2抗体包装25g
抗线粒体抗体(AMA)英文名称：AMA ELISA Kit血管生成样蛋白3抗体包装500g
抗透明带抗体IgG(aZP-IgG)英文名称：aZP-IgG ELISA Kit甘油酯激线粒体抗体包装50MG
抗透明带抗体(aZP)英文名称：aZP ELISA Kit磷化内收蛋白a1抗体包装25ml
抗双链DNA抗体(dsDNA)英文名称：dsDNA ELISA Kit自噬体ATG16L2蛋白抗体包装1g
抗平滑肌抗体(ASMA)英文名称：ASMA ELISA Kit性磷抗体包装100g
抗凝血受体(ATR)英文名称：ATR ELISA Kit性磷抗体包装25g
抗凝血Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)英文名称：AT-Ⅲ ELISA Kit光激A相互作用蛋白1抗体包装25g
粘附相关激抗体B-淋巴激活抗原B7-2(LAB7-2)Palbociclib hydrochloride是高选择性的 CDK4/6 抑制剂，IC50 分别为11 nM 和 16 nM。
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒大肠杆 5-氟-2-甲氧基苯甲蛋白酪氨酸磷酸酶检测试剂盒
鲑色沉积物杆状 Fmoc-Glu(EDANS)-OtBu蛋白酪氨酸磷酸酶检测试剂盒
篮状属 5-甲氧基苯并[B]噻吩-2-酸蛋白酪氨酸磷酸酶1B检测试剂盒
平菇 2-氨基-5-甲基噻吩-3-羧酸甲酯蛋白磷酸酶检测试剂盒
三叶草根瘤 N-Boc-3-溴甲基蛋白酶激活受体4检测试剂盒
毛柄(金针菇) 3-氟-4-甲蛋白质二硫键异构酶检测试剂盒
异常汉逊酵母异常变种 2-氯-6-基异硫酸酯刀豆素A检测试剂盒
土曲霉 1,3-二氯-2-苯低半乳糖化IgA检测试剂盒
酿酒酵母 4-(2-氨基乙基)哌-1-甲酸叔丁酯低分子肝素检测试剂盒
冻土毛霉 2-甲基-3-噻吩甲酸低密度脂蛋白检测试剂盒
硬炭团 4-N-Cbz-2-羟甲基哌低密度脂蛋白胆固检测试剂盒
泛养副球 4-甲苯磺酰低密度脂蛋白受体检测试剂盒
菲尔德斯半岛拟诺卡氏 1,2,3,4-四氢-1-萘甲酸低密度脂蛋白受体相关蛋白1检测试剂盒
米曲霉 2-溴苯并[9,10]菲低密度脂蛋白受体相关蛋白4检测试剂盒
还原硫酸盐互营杆* 2-异基苯低密度脂蛋白受体相关蛋白5检测试剂盒
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