详细介绍
ELISA Kit检测试剂盒优点多,更加方便我们的科研学者进行科学实验,是科研实验的好伙伴。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
CEA ELISA Kit | GOY-E99856 |
实验流程:
1. 实验前标准品、试剂及样本的准备;
2. 加样(标准品及样本)100µL,37°C孵育1小时;
3. 吸弃,加检测溶液A100µL,37°C孵育1小时;
4. 洗板3次;
5. 加检测溶液B100µL,37°C孵育30分钟;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分钟;
8. 加终止液50µL,立即450nm读数。?
样本实验前准备:
ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
(1)血清
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
(4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
(5)培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(6)组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
注意事项:
1.加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水?。?/span>
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
LB肉汤颗粒 250g 用于分子生物中大肠杆菌的培养
显色培养基系列
MUG培养基 100g 用于药品和生物制品中大肠埃希氏菌的检测
茜素-β-半乳糖苷琼脂(Aliz-gal琼脂) 100g 用于食品、饮料和饮用水中大肠菌群快速检测和计数(GB/T)
大肠杆菌显色培养基 1000(ML) 用于快速、准确检测大肠杆菌大肠杆菌培养24小时,大肠杆菌显蓝绿色
大肠菌群显色培养基 1000(ML) 用于快速、准确检测大肠菌群,培养24小时,大肠菌群显蓝绿色
大肠杆菌/大肠菌群显色培养基 1000(ML) 用于快速、准确同时检测大肠杆菌和大肠菌群,培养24小时,大肠杆菌显蓝绿色-紫色,大肠菌群显红色
大肠杆菌/大肠菌群显色培养基(平皿) 9CM平皿 用于快速、准确同时检测大肠杆菌和大肠菌群,培养24小时,大肠杆菌显紫色,大肠菌群显红色
TBX培养基 1000(ML) 用于快速、准确检测大肠杆菌,培养24小时,大肠杆菌显蓝绿色
细菌总数显色培养基 250g 用于快速、准确检测细菌总数,培养24小时,细菌显红色
O157显色培养基 1000(ML) 用于O157菌的显色培养,O157菌显亮红色、淡红色或红色
沙门氏菌显色培养基 1000(ML) 用于沙门氏菌的显色培养沙门氏菌显亮红色
李斯特氏菌显色培养基 1000(ML) 用于李斯特氏菌的显色培养,单增李斯特氏菌显蓝色,外围有一不透明环
金黄色葡萄球菌显色培养基 1000(ML) 用于金黄色葡萄球菌的显色培养,金黄色葡萄球菌显蓝绿色
CEA/CD66癌胚抗原ELISA KitFBXO42 FBXO42蛋白抗体 规格: 0.2ml
PPIA/Cyclophilin A 亲环蛋白(亲环素)PPIA抗体 规格: 0.1ml
HDL 高密度脂蛋白抗体 规格: 0.2ml
NPR2L/G21 protein G21蛋白质抗体 规格: 0.2ml
BTNL8 嗜脂蛋白样8抗体 规格: 0.2ml
CARD8 凋亡加强结构域蛋白8抗体 规格: 0.1ml
Bad 相关死亡促进因子Bad抗体 规格: 0.1ml
ANKRD33B 锚蛋白重复结构域蛋白33B抗体 规格: 0.2ml
CTn1/Troponin I/TNNC1 心肌肌钙蛋白抗体 规格: 0.1mlMouse Anti-human IgG/Bio 生物素标记的小鼠抗人IgG 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG 兔抗马IgG 规格: 1mgTLK2 丝氨酸/苏氨酸激酶TLK2抗体 规格: 0.2ml
Collagen VIII alpha 1 8型胶原抗体(内皮胶原蛋白) 规格: 0.2mlCLN3 神经细胞蜡样质脂褐质沉积病蛋白CLN3抗体 规格: 0.2ml
IL-6 白介素6抗体 规格: 0.1mlDACH1 细胞命运决定因子DACH1抗体 规格: 0.2ml
EF1a 翻译延伸因子EF-1a抗体 规格: 0.2mlCDK11 周期素依赖性激酶11抗体 规格: 0.2ml
Phospho-TAK1(Thr184) 磷酸化转化生因子β活化激酶1 规格: 0.1mlVTN/Vitronectin 玻璃粘连蛋白抗体 规格: 0.1ml
使用方法:
测定法的灵敏度来自作为报告的酶。,酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 24μg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
12μg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
6μg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
3μg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.5μg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。|
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。