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详细介绍
商品介绍：
本试剂盒应用范围广，可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。 TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 细胞凋亡检测试剂盒（Alexa Fluor 647）可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3′-羟基（3′-OH）末端掺入Alexa Fluor 647-12-dUTP，从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。Alexa Fluor 647为红色荧光染料，具有很高的稳定性和很强的亮度。 试剂盒组份： 5×Equilibration Buffer——————————1.25 ml Alexa Fluor 647-12-dUTP Labeling Mix———100 μl Recombinant TdT Enzyme——————————20 μl Proteinase K(2 mg/ml)———————————40 μl 注意事项 1) 需自备用于洗涤细胞的PBS，用于封片的抗荧光淬灭封片液，用于固定的4%多聚。 2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 储存条件：-20℃，有效期一年。 |
以下是细胞生物学试剂的详细介绍：
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 647) | 20 rxn | 1～3天 |
操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
公司产品仅用于科研细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
上皮中性粒细胞激活肽78(ENA78)英文名称：ENA78 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白25抗体包装500mg
上皮性钙黏附蛋白(CDHE)英文名称：CDHE ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白28A抗体包装1g
上皮型脂肪结合蛋白(FABP5)英文名称：FABP5 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白28B抗体包装5g
杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)英文名称：BPI ELISA Kit肿瘤/抗原74抗体包装1g
色胺羟化2(TPH2)英文名称：TPH2 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白38抗体包装25g
色胺羟化1(TPH1)英文名称：TPH1 ELISA Kit7号染色体开放阅读框72抗体包装5g
三叶因子3(TFF3)英文名称：TFF3 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白42抗体包装100g
三叶因子2(TFF2)英文名称：TFF2 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白47抗体包装25g
三肽基肽Ⅰ(TPP1)英文名称：TPP1 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白43抗体包装5g
三磷腺苷(ATP)英文名称：ATP ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白46抗体包装1g
三磷肌(IP3)英文名称：IP3 ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白63抗体包装1g
朊病毒蛋白(PRNP)英文名称：PRNP ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白54抗体包装5g
软骨关联蛋白(CRTAP)英文名称：CRTAP ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白61抗体包装100ml
软骨寡聚基质蛋白(COMP)英文名称：COMP ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白8抗体包装25ml
乳脂球表皮生长因子8(MFGE8)英文名称：MFGE8 ELISA Kit神经酰激CERK抗体包装100g
: AS3.2783资源名称: 泡盛曲霉 质量规格：纯度> 98%,BR，可用于培养转化生长因子β激蛋白22试剂盒紫檀芪;Pterostilbene
平滑假丝酵母Candida│parapsilosis 质量规格：HPLC>98%,标准品转化生长因子β3试剂盒竹节参皂苷IVa;Chikusetsu
普通变形杆菌Proteus│vulgaris 质量规格：纯度>98%,BR,可用于培养转化生长因子β2试剂盒梓酚;Catalponol
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 647)枯草芽孢杆 2,3-二羟基萘-6-磺酸钠血管内皮生长因子受体1Elisa
酿酒酵母 双氯芬酸血管内皮生长因子受体2Elisa
枯草芽孢杆 2-氨基-4-溴甲酯血管内皮粘附分子1Elisa
热带假丝酵母 一氯频哪酮血管内皮抑Elisa
溜曲霉 2-氨基-3-溴吡啶血管黏附蛋白Elisa
栖藻海杆状 3-基甲酯血管生成1Elisa
西蕃莲茎基腐病 (S)-(-)-Alpha-氨基-Gamma-丁内酯盐血管生成2Elisa
芽孢杆 高氯酸镍(II)六水合物, Reagent Grade血管生成受体酪氨酸激2Elisa
山柑芽孢杆 Fmoc-L-正缬氨酸血管生成样蛋白2Elisa
假单胞属 2-甲基-4-硝基吡啶血管生成样蛋白3Elisa
绳状篮状 2-苯甲酰噻吩血管生长Elisa
Bacillus 氯(4-)苯血管性血友病因子Elisa
金针菇—HP3 六水合磷酸镁铵血红蛋白Elisa
黑孢霉 酸镍六水合物血红蛋白CElisa
大肠埃希 氯化钕六水合物血红蛋白FElisa
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