人关节软骨原代细胞

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每3-4天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

人关节软骨细胞分离自关节软骨组织；关节软骨属于透明软骨，表面光滑、呈淡蓝色、有光泽，它是由一种特殊的叫做致密结缔组织的胶原纤维构成的基本框架，这种框架呈半环形，类似拱形球门，其底端紧紧附着在下面的骨质上，上端朝向关节面，这种结构使关节软骨紧紧与骨结合起来而不会掉下来，同时当受到压力时候，还可以有少许的变形，起到缓冲压力的作用。在这些纤维之间，散在分布着软骨细胞，软骨细胞由浅层向深层逐渐由扁平样至椭圆或圆形的细胞组成，这些软骨细胞维持关节软骨的正常代谢。关节软骨没有神经支配，也没有血管，其营养成分必须从关节液中取得，而其代谢废物也必须排至关节液中，关节软骨的这种营养代谢必须通过关节运动，使关节软骨不断的受到压力刺激才行，所以关节运动对于维持关节软骨的正常结构起重要的作用。关节软骨细胞位于关节软骨陷窝内。幼稚的关节软骨细胞位于关节软骨组织的表层，单个分布、体积较小、呈椭圆形，长轴与关节软骨表面平行，越向深层的关节软骨细胞体积之间增大呈圆形，细胞核圆形或卵圆形、染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。成熟的关节软骨细胞多2-8个成群分布于关节软骨陷窝内，这些关节软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，关节软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，关节软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。体外培养的关节软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介：

公司实验室分离的人关节软骨细胞采用胶原酶联合蛋白酶消化制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人关节软骨细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

① 组织块培养法

　　组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

　?、?消化培养法

　?、?悬浮细胞培养法

　　对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

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　　器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。(该细胞传代次数有限约 2 代，建议客户收到细胞后尽快安排后续实验)

1、取出细胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 培养箱中静置 6-8 小时，以稳定细胞状态。

2、待细胞达到 80%汇合时准备进行传代培养。

3、细胞传代：

1)吸出细胞瓶中的培养基，用 PBS 清洗细胞一次。

2)加入 0.125%消化液约 1mL 至培养瓶中，37℃消化 3min 左右；显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入培养液终止消化。

3)用吸管轻轻吹打混匀，按 1:2 或 1:3 等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的培养基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 细胞培养箱中培养。

4)待细胞贴壁后，培养观察，每隔 2-3 天更换新鲜的培养基。

MS1(小鼠胰岛内皮细胞)   BCHE Others Human 人 BCHE / CHE1 人细胞裂解液   犬肾细胞;MDCK(NBL-2)  BB7.2细胞，人分泌A2抗体B淋巴细胞 KM小鼠子瘤株,U27细胞 人小胶质细胞裂解物HML  CFPAC-1 兔原代肾动脉内皮细胞 兔原代肾足细胞

阿黑皮素原(POMC)重组蛋白 Recombinant Proopiomelanocortin (POMC)

CNTF Protein Human 重组人 CNTF 蛋白

DDR1重组小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (Fc 标签) Protein

IFNAR1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

AIF1重组人 IBA1 / AIF1 蛋白 Protein

大鼠膜联蛋白A2(ANXA2)试剂盒 ，英文名： ANXA2 ELISA Kit

Mouse insulin ELISA Kit (INS) 小鼠胰岛素(INS)试剂盒

RatangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISAKit 大鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGFAP(Mouseglialfibrillaryacidicprotein)ELISAKit小鼠神经胶质纤维酸性蛋白

细胞甘油二脂酰激酶(DAGKINASE)酶连续循环比色法定量试剂盒20次

RatsolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)试剂盒规格：96T/48T

小鼠白介素 -18 (mouse IL-18)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Biosource

小鼠白细胞抑制因子 (mouse LIF)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠淋巴细胞趋化因子 (mouse Lymphotactin)   作用：   ELISA   规格：   96T  

小鼠单核细胞趋化蛋白 -1 (mouse MCP-1)   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender

人关节软骨原代细胞小鼠坏死因子α(TNF-α)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human platelet aibody IgG/M/A (PA-IgG/M/A) ELISA Kit 人抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)试剂盒

Humandeubiquitinatingenzyme,DUBELISAKit 人泛素分解酶(DUB)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforABP(HumanAndrogenBindingProtein)ELISAKit人雄激素结合蛋白

合成酶(NOS)总活性终点比色法定量试剂盒50/100次

MouseN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNPELISAKit小鼠N端前脑素(-proBNP)试剂盒规格：96T/48T

EDA2R重组大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白 Protein

GATA-3(GATA binding factor 3 0.5mgGATA-3(GATA binding factor 3) GATA结合蛋白3抗原

CD300A重组人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白 Protein

ERP27 Protein Human 重组人 ERP27 蛋白 (Fc 标签)

MMP8 Protein Mouse 重组小鼠 MMP-8 / CLG1 蛋白