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詳細介紹
產品屬性：
中文名稱：Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱：
產品規(guī)格：50T|100T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產品僅用于科研
商品介紹：
產品背景： 細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內側翻向外側。在體內，巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS 高親和力特異性結合。PS 外翻發(fā)生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現之前，這使得Annexin V 與PS的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。 檢測原理： 在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)位于細胞膜的內側，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。 Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結合?？赏ㄟ^細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。用標記了PE的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。細胞壞死的過程中也會發(fā)生細胞膜損傷，壞死的細胞會結合Annexin V-PE。 Annexin V-PE 通常與細胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測凋亡細胞。常用的染料是7-AAD。正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，7-AAD 能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現紅色。 7-AAD/Annexin V-PE試劑盒將AnnexinⅤ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。壞死細胞可以同時與Annexin V-PE和7-AAD 結合顯色，而7-AAD 則被排除在活細胞(PE陰性)和早期凋亡細胞(PE陽性)之外。在沒有巨噬細胞的情況下，凋亡的后階段會像細胞壞死一樣發(fā)生整個細胞的解體，從而使凋亡晚期的細胞也同時被PE和7-AAD 結合染色呈現雙陽性。 儲存條件：染色液2-8℃避光保存；結合液2-8℃保存；長期不用-20℃保存。 Annexin V-PE染色液避免反復凍融，凍融2次以上可能會失效。長期保存分裝后-20℃保存。 有效期：一年。 |
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
鹽洛美利英文名稱： Lomefloxacin HCl結合轉化激活因子CITED1抗體包裝10MG
鹽馬尼地平英文名稱： Lomefloxacin HClⅡ型膠原α1蛋白/軟骨鈣抗體包裝100mg
鹽美西律（慢心率）英文名稱： Loteprednol EtabonateCSMD2蛋白抗體包裝500mg
鹽尼非卡蘭英文名稱： Loteprednol EtabonateCSMD3蛋白抗體包裝1g
鹽尼卡地平英文名稱： Lovastatin,Monacolin K鈣調神經磷CSTP1抗體包裝250mg
鹽普拉格雷英文名稱： Lovastatin,Monacolin KCTAGE6蛋白抗體包裝1g
鹽普魯英文名稱： Lubiprostone皮膚T淋巴瘤相關抗原4抗體包裝1g
鹽曲美他英文名稱： Lypressin Acetate膜蛋白CLDND2抗體包裝25g
鹽索他洛爾英文名稱： Matrixyl Acetate含半胱和組豐富域蛋白1抗體包裝5g
鹽特拉唑英文名稱： Meclofenoxate HCl豬圓環(huán)?、蛐鸵職さ鞍装b5g
鹽替羅非班英文名稱： Meclofenoxate HCl抗菌肽CAMP抗體包裝1g
鹽維拉帕米英文名稱： Megestrol Acetate卷曲螺旋結構域蛋白134抗體包裝5g
依那普利拉英文名稱： Megestrol Acetate卷曲螺旋結構域蛋白69抗體包裝1g
依普利英文名稱： Melanotan ⅡAcetate卷曲螺旋結構域蛋白98抗體包裝5g
*貝特英文名稱： Meloxicam卷曲螺旋結構域蛋白70抗體包裝1g
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質量規(guī)格：>98%,BR循環(huán)免疫復合物試劑盒鹽藥根堿;Jatrorrhizine
黃曲霉Aspergillus│flavus 質量規(guī)格：>98%血影蛋白試劑盒銀杏內酯C;Ginkgolide C
細腳擬青霉Paecilomyces tenuipes 質量規(guī)格：>98%,標準品血血小板衍生生長因子可溶性受體α試劑盒葉;Folic acid
Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒Sphingobium amiense 2-氨基-4,5-雙(2-甲氧基乙氧基)苯活化凝血因子VIIaElisa
大豆慢生根瘤 2,4-二氯苯蛋白質羰基化合物Elisa
粘質沙雷氏 2,4-二氯芐氯蛋白質亞硝基化Elisa
藤黃微球 2-溴-9-苯基-9H-咔唑一氧化氮代謝產物Elisa
毛栓孔 1-(5-氯吡啶-2-基)乙酮C型膠原蛋白Elisa
糙孢籃狀 5-(3-氯-2-氟苯甲基)-2,4-二甲氧20-羥基蛻皮Elisa
大球蓋菇 二氫-2,4,6-基-1,3,5-(4H)二噻I型膠原交聯(lián)羧基端肽Elisa
韓國鞘氨單胞 3-[(2-)氨基]促胰島生長Elisa
*正紅菇 3-[(2-)氨基]晚期糖基化終產物特異性受體Elisa
釀酒酵母 4-[(N-叔丁氧羰基)氨甲基]苯骨成型蛋白3Elisa
多汁乳菇 2-苯基肺炎支原體IgG抗體Elisa
淺黃微桿 2-羥基萘-1-羧酸甲酯涎液化糖鏈抗原6Elisa
榛針孢酵母 2-氟-6-(二氟甲氧基)吡氨基肽AElisa
腸膜明串珠腸膜亞種 4-溴吡啶-2(1H)-酮AMPA離子能谷氨酸受體1Elisa
乳桿屬 鄰乙氧基星形膠質源性蛋白Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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