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详细介绍
公司产品仅用于科研细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
以下是细胞生物学试剂的详细介绍：
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
| Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit | 20次|50次 | 1～3天 |
商品介绍：
本试剂盒提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。本试剂盒足够检测20个样品。 试剂盒组分： TdT酶———————————40μl Biotin-dUTP————————960μl TdT酶稀释液(选用)—————500μl Streptavidin-HRP——————22μl Streptavidin-HRP稀释液———1ml DAB显色液A————————6ml DAB显色液B————————6ml 标记反应终止液——————6ml 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder?；蜃镈NA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin(Streptavidin-HRP)结合，后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 本试剂盒有如下优点： (1)高灵敏度：背景染色极低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。 (2)特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。 (3)快速：仅需约2-3个小时即可完成。 (4)应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。 TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。 极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，好同时检测多个凋亡指标。 储存条件：-20℃。 |
操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
微管相关蛋白1A/1B轻链3B(MAP1LC3B)英文名称：MAP1LC3B ELISA Kit磷化β抑制蛋白1抗体包装1g
微管蛋白β3(TUBB3)英文名称：TUBB3 ELISA Kit磷化有丝分裂激A抗体包装25g
网膜(omentin)英文名称：omentin ELISA Kit磷化APS抗体包装5g
晚期糖基化终末产物(AGEs)英文名称：AGEs ELISA Kit有丝分裂激A抗体包装1g
脱氧胶原吡啶交联(DPD)英文名称：DPD ELISA Kit干扰诱导蛋白AIM2抗体包装25g
脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉(DPD)英文名称：DPD ELISA Kit通道蛋白-2抗体包装5g
脱氢表雄硫酯(DHEA-S)英文名称：DHEA-S ELISA Kit肿瘤抑制基因ABI2/精酪蛋白激结合蛋白抗体包装25ml
脱氢表雄S7(DHEA-S7)英文名称：DHEA-S7 ELISA KitADP核糖基化因子样11抗体包装5ml
脱氢表雄(DHEA)英文名称：DHEA ELISA KitARM重复X连锁蛋白ARMCX3抗体包装1g
褪黑(MT)英文名称：MT ELISA KitARM重复X连锁蛋白ARMCX1抗体包装5g
突触融合蛋白2(STX2)英文名称：STX2 ELISA KitARM重复X连锁蛋白ARMCX2抗体包装25g
突触融合蛋白1A(STX1A)英文名称：STX1A ELISA Kit自噬相关蛋白10抗体包装25g
透明质结合蛋白(HABP)英文名称：HABP ELISA Kit?；岷辖峁褂虻鞍?抗体包装5g
透明质(HA)英文名称：HA ELISA Kit基?；?抗体包装25g
铜蓝蛋白(CP/CER)英文名称：CP/CER ELISA Kit脂肪甘油三酯脂抗体包装5g
脂联受体2抗体激肽释放3(KLK3)Torin 2 是一种 mTOR 抑制剂，抑制内 mTOR 活性，EC50 为 0.25 nM，比作用于 PI3K (EC50: 200 nM) 选择性高
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)酿酒酵母 N-Boc-3-甲基哌Twist相关蛋白1检测试剂盒
黄青霉 2-甲基乙酰苯Twist转录因子检测试剂盒
齿孢青霉 3-甲基二苯T亚群检测试剂盒
枯草芽孢杆 3-乙基氨基-4-酚T亚群检测试剂盒
酿酒酵母 4-氯-2-苄基T球蛋白粘蛋白分子3检测试剂盒
玫瑰小双孢玫瑰亚种 2,5-二甲氧基苯乙酮UL16结合蛋白-1检测试剂盒
彩色豆马勃 邻基UL16结合蛋白-2检测试剂盒
新疆薄层 4-氯二苯甲UL16结合蛋白-3检测试剂盒
异常海杆状 2,4-二氯溴苯Vasorin;SLIT-like 2检测试剂盒
异常毕赤酵母 (S)-1-苯基-1,2,3,4-四氢异喹啉WNT1可诱导信号转导途径蛋白1检测试剂盒
海胆橙色小单孢 N,N-二甲酰二乙基缩X盒结合蛋白1检测试剂盒
运动节杆 4-酸三苯X-连锁凋亡抑制蛋白检测试剂盒
CCTCC AB 2012479 3-三氟甲基吡唑Yes关联蛋白检测试剂盒
热带假丝酵母 2,6-二氯苄氯ZBED3检测试剂盒
牛边缘无浆体（镇原株） 2,5-二羟基苯磺酸钙一水合物ZNF3基因检测试剂盒
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