详细介绍
实验流程:
1. 实验前标准品、试剂及样本的准备;
2. 加样(标准品及样本)100µL,37°C孵育1小时;
3. 吸弃,加检测溶液A100µL,37°C孵育1小时;
4. 洗板3次;
5. 加检测溶液B100µL,37°C孵育30分钟;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分钟;
8. 加终止液50µL,立即450nm读数。
ELISA Kit检测试剂盒优点多,更加方便我们的科研学者进行科学实验,是科研实验的好伙伴。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
EL ELISA Kit | GOY-E98772 |
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样本实验前准备:
ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
(1)血清
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
(4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
(5)培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(6)组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
注意事项:
1.加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
人载脂蛋白B100(ApoB100)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ApoB100 (Apolipoprotein B100) ELISA Kit
人拮抗凋亡转录因子(AATF)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human AATF (Apoptosis Antagonizing Transcription Factor) ELISA Kit
人肝脂酶 (LIPC)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human LIPC (Lipase, Hepatic) ELISA Kit
人胃脂酶 (LIPF)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human LIPF (Lipase, Gastric) ELISA Kit
人凋亡诱导因子(AIF)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human AIF (Apoptosis Inducing Factor) ELISA Kit
人凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human APAF1 (Apoptosis Protease Activating Factor 1) ELISA Kit
人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ASK-1 (Apoptosis Signal Regulating Kinase 1) ELISA Kit
人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF/FGF2)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human bFGF/FGF2 (Basic Fibroblast Growth Factor) ELISA Kit
人抑肽酶(AP)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human AP (Aprotinin) ELISA Kit
人异常凝血酶原(APT)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human APT (Abnormal Prothrombin) ELISA Kit
人中间α球蛋白抑制因子H4(ITIH4)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ITIH4 (Inter Alpha-Globulin Inhibitor H4) ELISA Kit
人水通道蛋白1(AQP-1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human AQP-1 (Aquaporin 1) ELISA Kit
人水通道蛋白2(AQP-2)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human AQP-2 (Aquaporin 2) ELISA Kit
人水通道蛋白3(AQP-3)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human AQP-3 (Aquaporin 3) ELISA Kit
EL内皮脂肪酶ELISA Kit甲磺酸加贝酯 CAS 规格: 100mg 订购|咨询
大风子 CAS 规格: 5g 订购|咨询
酞丁 CAS 规格: 50mg 订购|咨询
返魂草(叶千里光) CAS 规格: 5g 订购|咨询
五脂素 CAS 规格: 20mg/支 订购|咨询
酸皮肤素 CAS 规格: 30mg 订购|咨询
雷公藤甲素(雷公藤内酯醇) CAS 规格: 20mg 订购|咨询
20(s)-人参皂苷Rh2 CAS 规格: 20mg 订购|咨询
葡醛酸钠 CAS 规格: 100mg 订购|咨询
木香烃内酯 CAS 553-21-9 规格: 20mg 订购|咨询
苄赖氨酸 CAS 规格: 100mg 订购|咨询
苦参 CAS 规格: 1g 订购|咨询
苯钠 CAS 532-32-1 规格: 50mg 订购|咨询
长春胺 CAS 1617-90-9 规格: 100mg 订购|咨询
使用方法:
测定法的灵敏度来自作为报告的酶。*,酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 24μg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
12μg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
6μg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
3μg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.5μg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。|
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。