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 轉(zhuǎn)化細胞這些研究闡明了自噬的新功能, 開辟了新的研究方向, 也給了我們將自噬運用于低溫脅迫研究的靈感。本文對自噬的特異基因LC3進行標記, 通過檢測自噬小體*的LC3II自噬熒光點監(jiān)測自噬出現(xiàn)的時間與強度。隨后, 將HeLa細胞放置于不同溫度的低溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng), 模擬自然界中的急性冷刺激。

在這種急性冷刺激下, HeLa細胞出現(xiàn)了不同程度的自噬熒光點聚集, 證實了低溫可以誘導細胞產(chǎn)生自噬, 且溫度越低, 出現(xiàn)自噬的時間越早, 出現(xiàn)的自噬程度越強。結合細胞低溫下的存活率結果, 發(fā)現(xiàn)細胞自噬狀態(tài)與細胞存活狀態(tài)之間密切相關, 在低溫脅迫下, 細胞先啟動自噬, 當細胞內(nèi)的自噬慢慢減弱并開始消失時, 細胞開始出現(xiàn)死亡。

為了確定在低溫脅迫下, 細胞內(nèi)自噬所擔當?shù)慕巧? 使用 Bafilomycin A1阻斷了轉(zhuǎn)化細胞自噬。自噬阻斷后, 低溫脅迫下的細胞提前開始死亡, 且細胞的存活率較未阻斷的細胞出現(xiàn)顯著性下調(diào)。這證明了細胞受到急性冷刺激時, 自噬可以保護細胞, 維持細胞的存活, 而這種保護開始減弱時, 細胞便開始死亡。

為了深入了解低溫下自噬保護細胞的可能機制, 根據(jù)文獻資料, 測定了細胞內(nèi)的ROS。在低溫下, 細胞內(nèi)的ROS出現(xiàn)顯著上調(diào), Bafilomycin A1阻斷了細胞內(nèi)的自噬后, 細胞內(nèi)的ROS處于更高的水平。這些結果說明, 細胞在受到急性冷刺激后, 通過自噬來清除受損的線粒體, 進而影響細胞內(nèi)的ROS 水平。而低溫誘導的自噬對細胞內(nèi)ROS水平的影響可能參與了對細胞的保護作用, 其細節(jié)仍有待進一步研究。
4,7-Dimethyl-1,10-phenanthroline    CAS號：    3248-05-3    質(zhì)量規(guī)格：    4,7-二甲基-1,10-鄰二氮雜菲(>98.0%(T))    英文名稱：    >98.0%(T)        
4-[(4-Methoxybenzylidene)amino]benzonitrile    CAS號：    13036-19-6    質(zhì)量規(guī)格：    4-[(4-甲氧基苯亞甲基)氨基]氰苯(>98.0%(T))    英文名稱：    >98.0%(T)        
4-[(4-Methoxybenzylidene)amino]cinnamic Acid    CAS號：    25959-50-6    質(zhì)量規(guī)格：    4-[(4-甲氧基苯亞甲基)氨基]肉桂酸(>98.0%(T))    英文名稱：    >98.0%(T)        
4-[(tert-Butoxycarbonylamino)methyl]pyridine-2-carboxylic Acid    CAS號：    260970-57-8    質(zhì)量規(guī)格：    4-[(叔丁氧羰氨基)甲基]吡啶-2-羧酸(>96.0%(HPLC)(T))    英文名稱：    >96.0%(HPLC)(T)        
4-[2-(5-Ethyl-2-pyridinyl)ethoxy]benzenepropanoic Acid Ethyl Ester(Pioglitazone Impurity)    CAS號：    868754-42-1    質(zhì)量規(guī)格：    4-[2-(5-乙基-2-吡啶基)乙氧基]benzenepropanoic acide 乙酯(匹格列酮雜質(zhì))    英文名稱：    美國進口        
4-[3-(Methylamino)-1-(2-thienyl)propyl]-1-naphthalenol Hydrobromide (Duloxetine Impurity)    CAS號：    949096-01-9    質(zhì)量規(guī)格：    4-[3-(甲氨基)-1-(2-噻吩基)丙基]-1-萘酚氫溴酸鹽 (度洛西汀雜質(zhì))    英文名稱：    美國進口        
4-Acetamido-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-Oxyl Free Radical     CAS號：    14691-89-5    質(zhì)量規(guī)格：    4-乙酰氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>98.0%(GC))    英文名稱：    >98.0%(GC)        
4-Acetaminophen Sulfate Potassium Salt    CAS號：    32113-41-0    質(zhì)量規(guī)格：    4-對乙酰氨基酚硫酸鉀鹽    英文名稱：    美國進口  
轉(zhuǎn)化細胞